Etude genetique de l'arn polymerase i de saccharomyces cerevisiae

L'arn polymerase i assure la synthese nucleolaire d'un transcrit unique, le precurseur des arn ribosomiques, contribuant a plus de la moitie de l'activite transcriptionelle du noyau. C'est une enzyme complexe, avec 14 sous-unites distinctes, dont quatre ont une ressemblance plus ou moins forte avec la structure #2 de l'enzyme bacterienne, et cinq sont communes aux trois enzymes eucaryotiques, mais sans equivalent bacterien. Cinq autres sont propres a l'enzyme i. Les 14 genes correspondants ont ete clones dans ce travail, j'ai etudie deux des sous-unites de l'arn polymerase i, abc10 et a34. 5, dont les genes ont ete caracterises au laboratoire. La sous-unite commune (abc10) est totalement essentielle in vivo, cette proteine de taille tres reduite (70 aa) lie le zinc in vitro. Elle est fortement conservee chez les toutes les arn polymerases non bacteriennes. La mutagenese a permis de montrer que parmi tous les residus etudies seuls 4 cysteines sont strictement requises et ne tolerent aucune modification. Son homologue chez l'archee sulfolobus acidocaldarius n'etant pas fonctionnelle chez s. Cerevisiae, j'ai realise des proteines chimeriques et defini les residus typiquement eucaryotes essentiels pour l'arn polymerase i in vivo. Dans le cas de la sous-unite specifique a34. 5, nos donnees genetiques montrent, paradoxalement, qu'elle n'est pas essentielle a la croissance cellulaire. Par une approche a la fois biochimique et genetique, j'ai pu montrer que la sous-unite a34. 5 est bien une sous-unite de l'arn polymerase i et proposer un modele expliquant sa fonction.