5-氟尿嘧啶对肝癌细胞株PLC/RAF/5生物学特性及耐药机制的影响

目的研究化疗药物5-氟尿嘧啶（5-Fu）反复作用肝癌细胞株PLC/RAF/5后生物学特性的变化,探讨耐药肝癌细胞与肝癌干细胞之间的相关性。方法用低浓度的5-Fu（1μg/ml）反复多次作用于人肝癌细胞株PLC/RAF/5后建立PLC/RAF/5/5-Fu细胞株,观察两种细胞的形态学差异。用CCK-8法检测不同浓度的5-Fu（0、0.25、0.5、1、1.5、2μg/ml）对两种细胞增殖的抑制作用;在不同浓度的5-Fu（0.5、1、2μg/ml）作用48 h后,流式细胞仪分析不同浓度下两种细胞的凋亡情况;检测两种细胞中侧群细胞的比例;平板克隆集落实验比较两种细胞的克隆形成能力;Western Blot检测两种细胞中Bax、Bcl-2、ABCG2和Fox M1蛋白的表达情况。计量资料组间比较采用t检验。结果用化疗药物5-Fu成功建立PLC/RAF/5/5-Fu细胞株。PLC/RAF/5/5-Fu细胞比PLC/RAF/5细胞体积大,突起减少,呈长梭形改变,折光性增强。与亲本细胞相比,PLC/RAF/5/5-Fu细胞对5-Fu增殖抑制作用的敏感性降低,细胞周期G0/G1期比例降低,而S期和G2/M期比例上升;抗凋亡能力增加;侧群细胞比例增加;增殖能力增强,上述差异均具有统计学意义（P值均〈0.05）。Western Blot检测表明PLC/RAF/5/5-Fu细胞Bcl-2、Fox M1、ABCG2蛋白表达增强,而PLC/RAF/5细胞的Bax蛋白表达增强,差异具有统计学意义（P值均〈0.01）。结论细胞株PLC/RAF/5/5-Fu中肝癌干细胞可能是其耐药的根源;低浓度的5-Fu（1μg/ml）可以富集肝癌干细胞样细胞。