Detection of Helicobacter sp. in the biliary system of patients with cholelithiasis

目的近来,螺杆菌属细菌与胆道疾病的关系日益受到重视,并在胆固醇结石中检测到细菌DNA.为进一步研究胆囊结石病与螺杆菌感染的关系,对胆囊结石患者的胆石、胆汁,胆囊黏膜行螺杆菌16S rRNA基因检测.方法研究对象为29例胆囊结石病患者.胆汁和胆囊黏膜标本接种于需氧、厌氧和非选择性微需氧培养基培养.利用两对特异性的螺杆菌16S rRNA基因引物对患者的胆石、胆汁、胆囊黏膜标本行nested-PCR扩增,利用特异的螺杆菌DNA探针,对PCR产物行Southern杂交检测,并对1例胆囊黏膜PCR产物直接测序,将测序结果与基因库中的标准螺杆菌株序列作比较,采用Neighbor-joining法绘制种系发生树.氧化酶法测定胆石胆固醇含量.结果胆汁和胆囊黏膜标本经需氧、厌氧、微需氧培养,未发现螺杆菌生长.29例胆石标本nested-PCR分析,2例阳性(6.9%),23例胆汁中9例阳性(39.1%),29例胆囊黏膜中22例阳性(75.9%).PCR阳性的标本Southern杂交均为阳性.1例胆囊黏膜标本的PCR扩增产物纯化后直接测序,证实为螺杆菌属细菌.29例胆囊结石的平均胆固醇含量为(62.2±3.8)%,PCR结果阳性的2例胆石为胆固醇为主的混合性结石.结论螺杆菌DNA存在于胆囊结石、胆汁及胆囊黏膜中,胆道系统螺杆菌感染可能和胆囊结石的形成有一定关系.