SFRP CO-03 – Culture et caractérisation de colonosphères humains

Objectifs Les cellules souches intestinales (CSI) permettent le developpement de mini-intestins in vitro . Notre but etait de cultiver et caracteriser des colonospheres humains, monocouche de cellules epitheliales organisee en 3D. Materiels et methodes A partir de resection colique, les cryptes sont re-suspendues dans du Matrigel puis ensemencees. Un milieu complet est ajoute pour reconstituer le microenvironnement des CSI, remplace par un milieu de differenciation pendant 5 jours. Les colonospheres ont ete fixes a J8 pour analyse immunohistochimique. Resultats principaux Les colonospheres ont un pole apical (actine +) oriente vers une lumiere centrale et un pole baso-lateral (β-catenine +). Il y a une zone apoptotique centrale (caspase 3 active +) et des zones de proliferation (Ki-67 +) ; des cellules immatures (CD44 et CD24 +) et des cellules differenciees : Goblet (mucine 2 +), enteroendocrines (chromogranine A +) et colonocytes (cytokeratine 20 +). Apres differenciation, nous retrouvons une diminution de cellules immatures et l’expression d’occludine (jonctions serrees), dans des zones distinctes. Conclusions Ce modele est bien etabli dans nos mains, avec des perspectives de recherche sur les maladies inflammatoires chroniques de l’intestin.