Análisis funcional de mutaciones en el promotor del LDLR y su relación con la hipercolesterolemia familiar

Resumen Introduccion La hipercolesterolemia familiar (HF) es una enfermedad autosomica dominante, causada principalmente por mutaciones en la region codificante del gen del receptor de las LDL (LDLR). Sin embargo, varias mutaciones situadas en el promotor de LDLR se han asociado con la HF. La busqueda de mutaciones en sujetos clinicamente diagnosticados como HF revelo la presencia en la zona promotora de LDLR de 4 mutaciones nuevas en heterocigosidad. Objetivo Estudiar la funcionalidad de las 4 mutaciones nuevas en el promotor del LDLR (c.-36T>G, c.-136C>G, c.-140C>G y c.-208A>T) encontradas en Espana mediante el uso de la plataforma LIPOchip ® en pacientes con sospecha clinica de HF. Metodos Se realizo el analisis funcional de las mutaciones mediante ensayos de retardo de la movilidad electroforetica (EMSA) y transfeccion de promotores mutados con el gen reportero de la luciferasa en cultivos celulares de HepG2. Resultados Las mutaciones c.-136G y c.-140G localizadas en el elemento regulador R3 mostraron un cambio significativo en el patron de afinidad por las proteinas nucleares en los EMSA. Ademas, estas mutaciones produjeron una reduccion de la actividad del promotor LDLR del 88-93%. Las mutaciones c.-36G y c.-208T no provocaron cambios significativos ni en los experimentos EMSA ni con genes reporteros. Conclusiones Las mutaciones localizadas en el elemento R3 se asocian con HF, mientras que las que se encuentran fuera de los elementos reguladores del promotor de LDLR no son causa directa de hipercolesterolemia. Nuestros resultados revelan la importancia de realizar analisis de funcionalidad de las variantes encontradas en la region promotora de LDLR con objeto de conocer su implicacion con el fenotipo HF.