APLICACIÓN DE LA TÉCNICA RT-PCR PARA Metapneumovirus aviario (aMPV)

Los principales anfitriones de Metapneumovirus aviario (aMPV) son los pollos de engorde y pavos. El virus afecta el tracto respiratorio superior de los pavos desencadenando la Rinotraqueitis Viral de los pavos (RVP). El principal objetivo de ese estudio fue estandarizar una tecnica de RT-PCR para la deteccion del aMPV, a traves del uso del kit AccessQuick-PCRsystem (Promega®). Se utilizaron muestras de hisopos traqueales y pulmonares de 38 pavos comerciales con sintomas respiratorios y dos hisopos oculares de faisan. El RNA viral se extrajo utilizando el kit DNA RTP® DNA/RNA Virus Mini Kit (STRATEC Molecular). A continuacion, las muestras se sometieron a la RT-PCR OneStep utilizando el kit AccessQuick RT-PCR (Promega®). Todas las 40 muestras analizadas por RT-PCR fueron negativas, excepto la muestra de vacuna que se utilizo como control positivo. El aMPV no causa latencia en pollos de engorde o pavos, por lo que la excrecion viral es limitada. Asi, la ausencia de la deteccion de genoma viral en este estudio puede ser justificada debido a la edad que se recogieron las muestras en los pavos, con 140 dias en el matadero, imposibilitando de este modo la amplificacion del genoma del aMPV. Sin embargo, ese estudio tambien muestra que la RT-PCR se ha demostrado eficaz para detectar el genoma viral del aMPV, pudiendo asi ser utilizado como una herramienta de diagnostico rapido para investigacion y estudio de casos de aMPV en bandada de pavos. Os principais hospedeiros do Metapneumovirus aviario (aMPV) sao os frangos de corte e perus. O virus acomete o trato respiratorio superior dos perus desencadeando a Rinotraqueite Viral dos Perus (RVP). O principal objetivo deste trabalho foi padronizar uma tecnica de RT-PCR para a deteccao do aMPV, por meio do uso do kit AccessQuick RT-PCR system (Promega®). Foram utilizados amostras de suabes de traqueia e pulmao de 38 perus comerciais com sintomatologia respiratoria e dois suabes oculares de faisao. O RNA viral foi extraido utilizando-se o kit RTP® DNA/RNA Virus Mini Kit (STRATEC Molecular). Em seguida as amostras foram submetidas a RT-PCR One Step, utilizando o kit AccessQuick RT-PCR system (Promega®). Todas as 40 amostras testadas por RT-PCR foram negativas, exceto a amostra vacinal que foi utilizada como controle positivo. O aMPV nao causa latencia em frangos de corte ou perus, logo a excrecao viral e limitada. Dessa forma, a ausencia da deteccao de genoma viral neste estudo pode ser justificada devido a idade que as amostras foram coletadas em perus, com 140 dias no abatedouro, impossibilitando dessa maneira a amplificacao do genoma do aMPV. Porem, esse estudo tambem mostra que a RT-PCR se mostrou eficaz para detectar o genoma viral do aMPV, podendo dessa forma ser utilizado como uma ferramenta de diagnostico rapido para investigacao e estudo de casos de aMPV em rebanho de perus. The main hosts of Avian metapneumovirus (aMPV) are broilers and turkeys. This virus affects the upper respiratory tract of turkeys, triggering Turkey Rhinotracheitis (TRT). The aim of this study was to optimize a RT-PCR technique in order to detect aMPV using the AccessQuick RT-PCR system (Promega®) kit. Tracheal and lung swab samples from 38 commercial turkeys with respiratory symptoms and two ocular swabs from pheasants were analyzed. Viral RNA was extracted using RTP® DNA/RNA Virus Mini Kit (Molecular STRATEC) kit. All 40 samples tested were negative in the RT-PCR. The only positive sample was a vaccine strain, used as the positive control. The aMPV does not cause latency in broilers, chickens or turkeys, thus, the viral excretion is limited. However, the absence of viral genome detection in this study may be justified due to the age the samples were collected, since they were collected in turkeys with about 140 days in the slaughterhouse, thus preventing the amplification of the aMPV genome. This study shows that the RT-PCR is effective to detect aMPV viral genome and may be used as a rapid diagnostic tool for research and for the studying of aMPV cases in turkey flocks in Brazil.