多重PCR—SSP技术应用于HPA-1-17bw基因分型研究和广西壮族人群HPA多态性的分布

目的建立应用于HPA-1—17bw基因分型的多重聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）技术，对广西壮族人群HPA名态性分布进行调查。方法设计多种HPA序列特异性引物的组合，在1个PCR反应体系中用时扩增多个HPA基因，根据扩增片断的有无和大小，指定相应的HPA基因型，并以17例国际合作研究项目提供的HPA对比DNA配组标本，以及100例已知HPA型的血小板供者的DNA标本作验证。使用验证后的技术对2659例无血缘关系的广西牡成人群展开HPA-1—17bw的基因分型和抗原多态性研究。结果建立了由16种PCR引物混合物，其中有6种多重PCR多重PER引物混合液组成的PCR—SSP反应体系，可用于HPA-1～17bw等位基因的检测。以HPA参比DNA配组标本，以及已知HPA型的供者的DNA标本的检测作验证，HPA分型结果完全一致；在2659名广西壮族人群中各HPA等位基因频率分布为：HPA—1α和-16为0．9915和0．0085，HPA．2a和．26为0．9569和0．0431，HPA-3α和-3b为0．5122和0．4878，HPA-5α和-56为0．9850和0．0150。HPA．6a和-66为0．9851和0．0149，HPA-15α和-15b为0．5256和0．4744；HPA-4、HPA-7-14bw、HPA-16—17bw只有a／a的纯合子；HPA-2—3、HPA，6船以及HPA．15均存在a／a和b／b纯合子基因型个体。结论多重PCR-SSP技术应用于HPA基因分型减少了PCR扩增反应数量，节省了人力、物力，HPA分型系统性强，可用于大量标本的HPA-1—17bw基因分型等研究和筛查工作；应用该方法研究证明广西壮族人群HPA多态性分布具有民族特征，有助于对壮族人群血小板免疫学特点的了解。