Identification et caractérisation de mutations et de produits chimiques perturbant le répression par les microARN chez la drosophile

Les microRNA sont de petites molecules d’ARN non-codantes de 22nt qui s’apparient avec des ARN messagers cibles et induisent leur degradation, ou inhibent leur traduction. Ils jouent un role essentiel dans le controle du developpement et de la differenciation cellulaire, et leur deregulation induit des defauts de developpement et des maladies genetiques. La comprehension des mecanismes de biogenese et d’action des miRNA constitue donc une etape essentielle vers la comprehension et le traitement de ces desordres. J’ai construit un systeme indicateur « automiR » qui permet de suivre l’activite de miRNA artificiels diriges contre la proteine fluorescente GFP. Dans ce systeme, les miRNA artificiels s’associent a la proteine Argonaute-2 pour reprimer l’expression de la GFP par clivage de l’ARN messager, et non a la proteine Argonaute-1 partenaire d’une majorite de miRNA chez la drosophile. Cette particularite constitue l’atout principal du systeme automiR. Il est maintenant etabli qu’une fraction des miRNA agit via AGO2, mais cette voie de repression des genes reste mal caracterisee. J’ai etabli une lignee cellulaire exprimant le systeme automiR et je l’ai utilisee pour cribler des mutations et des produits chimiques inhibant les miRNA. Le crible genetique m’a permis identifier 20 genes dont le role dans la repression par les miRNA n’avait pas encore ete decrit. Leur caracterisation a revele qu’ils sont requis, en aval de la biogenese des miRNA, pour leur activite repressive. Le crible chimique m’a permis d’indentifier 64 composes inhibant l’activite des miRNA representant de nouvelles therapeutiques potentielles pour lutter contre les desordres lies a la surexpression de miRNA