CD24^＋CD44^＋胰腺癌细胞的获取及其干细胞特性的初步鉴定

背景与目的：近年研究发现,肿瘤内存在极小一部分细胞,决定肿瘤的恶性表型及生物学特性,被称为＂肿瘤干细胞＂。本研究拟从人原发胰腺癌组织中找到具有干细胞特性的胰腺癌细胞,为今后靶向干预胰腺癌干细胞,解决胰腺癌治疗的临床难题提供研究基础。方法：将人原发胰腺癌组织种植于NOD/SCID小鼠成瘤,对移植瘤细胞进行流式细胞分选;将流式细胞仪分选获得的细胞用无血清、含有生长因子的DMEM/F12培养基培养,观察细胞的生长、传代及体外干细胞球形成能力;将细胞接种于非肥胖型糖尿病/重症联合免疫缺陷型（Nonobese diabetic/severe combined immunodeficiency,NOD/SCID）小鼠,观察、比较成瘤率,免疫组化法检测干细胞移植瘤肿瘤分化相关抗原Ki67、CK7及甲基化调控因子MBD1的表达;免疫荧光检测细胞Hedgehog、BMI-1的表达。结果：人原发胰腺癌组织种植于NOD/SCID小鼠可部分成瘤,对移植瘤细胞进行流式细胞分选,获得CD24^＋CD44^＋细胞（获得率0.6%～1.8%）;将CD24^＋CD44^＋细胞用无血清、含有生长因子的DMEM/F12培养基培养,细胞呈悬浮球状生长,可连续传代并能再次形成干细胞球;将10^2个CD24^＋CD44^＋细胞接种于NOD/SCID小鼠,成瘤率12.5%（1/8小鼠成瘤）,将103个CD24^＋CD44^＋细胞接种于NOD/SCID小鼠,4周后100%成瘤,而同样数量的CD24-CD44-胰腺癌细胞则无法成瘤（P〈0.05）,免疫组化法检测干细胞移植瘤中部分细胞表达Ki67、CK7及MBD1阳性;免疫荧光检测证实CD24＋CD44＋细胞阳性表达Hedgehog、BMI-1,表达量分别高于CD24^-CD44^-细胞9.95倍和2.74倍（P〈0.05）。结论：所获得的CD24＋CD44＋细胞具有胰腺癌干细胞特性,可作为今后胰腺癌干细胞研究的实验基础。