La transduction du signal et l'apoptose dans le premier stade de developpement embryonnaire chez la souris, l'application du modele cellulaire souches embryonnaires

L'apoptose joue un role important dans les aspects a la fois physiologiques et pathologiques du developpement embryonnaire normal. L'ifn-gamma a ete decrit comme un facteur embryonnaire cytotoxique, cependant le mecanisme de cette toxicite n'a pas ete demontre. Au commencement de ce travail de these, nous avions emis l'hypothese que l'ifn-gamma pourrait inhiber le developpement de l'embryon en induisant des phenomenes d'apoptose. Pour le verifier, nous avons utilise un modele base sur l'utilisation des cellules es de souris (lignees ck35 et cj7). Par diverses techniques, cytometrie en flux apres marquage a l'annexin-v, analyse d'adn sur gel, etude de la viabilite cellulaire, nous avons demontre que l'ifn-gamma induisait la mort des cellules es par apoptose, de maniere dose dependante. Comme la molecule fas est egalement souvent impliquee dans les phenomenes d'apoptose, nous avons examine son expression dans les cellules es par cytometrie en flux. Nous avons ainsi trouve une expression de fas et non de son ligand (fasl). De plus, des anticorps monoclonaux pouvant mimer l'effet de fasl, induisent l'apoptose des cellules es. De facon interessante, lorsque ces anticorps ont ete rajoutes dans le milieu de culture d'embryons de souris au stade de 2 cellules, nous avons observe une diminution importante du taux d'eclosion des blastocystes par rapport au groupe traite avec un anticorps irrelevant. Ces resultats indiquent que la voie de signalisation mediee au travers de fas joue un role physiologique important dans l'implantation de l'embryon (blastocyste). Cependant, dans des etats pathologiques comme des endotoxemies, l'augmentation de l'expression de fas participerait a une mauvaise implantation de l'embryon et donc a un avortement spontane. Enfin, nous avons etudie l'expression de l'oncoproteine bc1-2, molecule intervenant dans la regulation de nombreux phenomenes d'apoptose, apres traitement des cellules es par l'ifn-gamma. Les resultats montrent que la population des cellules en apoptose a un taux de bc1-2 inferieur a celle des cellules survivant au traitement. Ce travail permet ainsi de presenter de nouveaux mecanismes impliques dans des phenomenes d'embryotoxicite jusqu'alors peu documentes.