棉花Ghl4-3-3L2基因的分子克隆及其互作蛋白质的初步鉴定

根据本实验室蛋白质组学研究鉴定的EST序列，克隆了一个可能在棉花纤维起始和伸长发育阶段起调控作用的棉花14—3—3蛋白质的全长cDNA，定名为Gh14-3-3L2。Gh14-3-3L2蛋白毒性大．难以通过酵母双杂交途径鉴定其互作蛋白质组。因此，本研究首先经原核表达并纯化出添加六联组氨酸标签的Gh14—3-3L2蛋白，以此蛋白质为诱饵，以开花前3d至开花后6d正常野生型、徐州142无纤维突变体和Li-1无长绒纤维突变体胚珠或纤维混合蛋白质为猎物样品，采用Pull—down技术分离、富集Gh14-3-3L2相互作用蛋白质．再经2-DE和MALDI—MS／MS串联质谱分析，鉴定了7个可能与Gh14—3—3L2相互作用的蛋白，其功能有作为分子伴侣、参与微囊的运输、代谢、信号转导等。为进一步解析Gh14—3—3L2的功能以及棉花纤维发育的分子调控网络奠定了基础。