Análise da participação dos genes homeobox HOXA1 e HOXB7 em carcinomas espinocelulares orais

Os membros da familia HOX de genes homeobox sao classicamente conhecidos por regular a proliferacao e a diferenciacao celular durante o desenvolvimento embrionario. Contudo, inumeros estudos demonstraram uma expressao alterada de alguns membros desta familia em neoplasias, incluindo melanomas, leucemias e cânceres de colon, pulmao, rim e prostata. Estudos em nosso laboratorio caracterizaram o perfil de expressao dos 39 genes da familia HOX em amostras orais de tecido normal e carcinoma espinocelular (CEC), identificando alguns genes diferencialmente expressos. Dentre estes genes estavam HOXA1 e HOXB7. Interessantemente, as expressoes aberrantes de HOXA1 e/ou HOXB7 em neoplasias malignas foram relacionadas a um controle da proliferacao, desdiferenciacao, invasao e efetividade no reparo do DNA. Os objetivos deste estudo foram compreender os efeitos da superexpressao e da neutralizacao dos genes HOXA1 e HOXB7 na modulacao dos principais eventos biologicos associados aos fenotipos tumorais e determinar o valor prognostico da expressao destes genes para pacientes afetados por CEC oral. Para alcancar estes objetivos, construimos clones da linhagem celular de queratinocitos normais HaCAT superexpressando os genes HOXA1 (HaCAT-HOXA1) ou HOXB7 (HaCAT-HOXB7), inibimos a expressao endogena destes genes na linhagem de CEC oral SCC-9 por meio da tecnica de RNA de interferencia e realizamos analise imunohistoquimica em 132 amostras de CEC oral para correlacionar as positividades de HOXA1 e HOXB7 com as caracteristicas clinico-patologicas dos tumores. Nossos resultados revelaram que as superexpressoes de HOXA1 e HOXB7 significantemente promoveram a proliferacao das celulas HaCAT, enquanto que a inibicao destes genes nas celulas SCC-9 resultou em uma dramatica inibicao da proliferacao. As superexpressoes de HOXA1 e HOXB7 nao foram capazes de modular as taxas de apoptose, adesao e invasao, a expressao de marcadores da transicao epiteliomesenquima (TEM) e nao promoveu crescimento independente de ancoragem (softagar). Tumores classificados com expressao elevada de HOXA1 demonstraram estadio clinico T e N mais avancados, menor diferenciacao das celulas neoplasicas e elevado potencial proliferativo. Pacientes apresentando tumores com elevada positividade para HOXA1 demonstraram uma sobrevida de 5 anos significantemente menor que pacientes com tumores demonstrando baixa positividade para HOXA1 (p=0,026). A expressao imuno-histoquimica de HOXB7 correlacionou significantemente com consumo de bebidas alcoolicas, estadio clinico N, infiltracao vascular e potencial proliferativo dos tumores. Expressao elevada de HOXB7 foi tambem significantemente correlacionada com menor sobrevida global (p=0,009) e uma tendencia para menor sobrevida livre de doenca foi observada para pacientes com tumores classificados com forte expressao de HOXB7 (p=0,083). Uma positiva correlacao entre as expressoes de HOXA1 e HOXB7 foi evidenciada (rs=0,25 e p=0,008). Em conclusao, nossos resultados sugerem que as superexpressoes dos genes HOXA1 e HOXB7 podem contribuir para a progressao tumoral por promoverem a proliferacao das celulas tumorais e indicam que HOXA1 e HOXB7 podem ser determinantes importantes do prognostico de pacientes com CEC oral. Abstract