MiRNA-24、miRNA-34a和miRNA-375抑制小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞中Neurod1／BETA2的蛋白表达

目的在小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞中分析miRNA-24、miRNA-34a和miRNA-375对Neurod1／BETA2的表达调控以及作用方式。方法设计并合成针对小鼠Neurod1基因3’非翻译区（3’untranslated region,3’UTR）序列的引物，克隆于pMIR-REPORT^TM荧光素酶报告基因载体中；用miranda软件预测可能调控Neurod1表达的miRNAs，挑选在B细胞中有相关功能研究的miRNAs并委托公司合成pre—miRNAs；脂质体法转染至MIN6细胞中。荧光素酶报告基因技术分析这些miRNA对Neurod1的作用；定量RT．PCR分析Neurod1的mRNA水平；Western印迹检测Neurod1的蛋白表达水平；GSIS检测干扰Neurod1后MIN6细胞的功能。结果成功制备小鼠Neurod1基因的3’UTR荧光素酶报告基因载体；选取了预测在Neurod1的3’UTR有互补结合位点的3个miRNAs（miRNA-24、miR-34a和miR．375），并挑选一个没有互补结合位点的miRNA（miR-29a）作为阴性对照；在MIN6细胞中过表达pre-miRNA-24、pre-miR-34a和pre-miR-375能够抑制Neurod1基因3’UTR荧光素酶报告基因的活性，而过表达阴性对照miRNA-29a则不能抑制其活性；pre—miRNA-24、pre-miR-34a和pre-miR-375还可以不同程度抑制Neumd1的蛋白表达；在MIN6细胞中干扰Neurod1蛋白表达能够降低细胞的GSIS功能。结论miRNA-24、miR-34a和miR-375能够抑制小鼠胰岛B细胞系MIN6细胞中Neurod1的蛋白表达。