Využití mozkomíšního moku pro analýzu mikroRNA

Souhrn Východiska: Deregulovane hladiny mikroRNA (miRNA) - kratkých nekodujicich RNA pojicich se s patogenezi mnoha onemocněni - byly pozorovany i v mozkomisnim moku (CSF). Analýza miRNA v CSF u pacientů postižených nadory centralni nervove soustavy by mohla pomoci vyvinout novou diagnostickou platformu umožňujici přesnějsi diagnostiku. Proto se v nasi studii snažime optimalizovat metodicke přistupy sloužici pro detekci miRNA, jako je izolace kratkých RNA a výběr vhodne technologie pro globalni profilovani miRNA v CSF. Material a metody: V ramci optimalizace izolace RNA z CSF bylo porovnavano několik komercně dostupných izolacnich kitů s různými modifikacemi v protokolu. Při výběru nejvhodnějsi metody pro vysokokapacitni profilovani miRNA byly testovany různe panely založene na kvantitativni PCR a sekvenovani nove generace. Výsledky: Jako nejvhodnějsi izolacni kit byl vyhodnocen Urine microRNA Puriffication kit (Norgen). Jako nelepsi metoda pro nasledne vysokokapacitni profilovani miRNA v CSF bylo vybrano sekvenovani nove generace. Zavěr: Optimalizovali jsme protokol pro izolaci RNA a vysokokapacitni analýzu miRNA v mozkomisnim moku.