DETERMINAÇÃO DO INFLUXO CELULAR DE ZINCO EM LEUCÓCITOS HUMANOS: CINÉTICA DE ORDEM ZERO

O zinco e um elemento muito importante para as celulas humanas estando envolvido no desenvolvimento, diferenciacao e proliferacao celular, atuando tambem como modulador no crescimento da mesma. Este metal esta bem distribuido na celula, sendo encontrado no nucleo, citosol e associado a membranas. Existem dois grupos de proteinas que regulam o influxo e efluxo de Zn do citosol para mediar a homeostase celular. Um dos desafios no estudo toxicologico de Zn e conhecer a quantidade capaz de entrar para o citoplasma da celula exposta a esse metal. Alem disso, e importante saber se a entrada na celula ocorre em percentual constante ou variavel, proporcional ou nao a concentracao de exposicao celular. O trabalho teve como objetivo a determinacao de niveis de Zn intracelular antes e apos a exposicao a fim de compreender a entrada cinetica de Zn em leucocitos humanos sob condicoes experimentais controladas. Para quantificar o teor de Zn intracelular foram analisadas seis repeticoes usando a seguinte estrategia de triagem: (1) Controle negativo - suspensao de leucocitos ajustado (LS) (104 celulas/mm cubico) em pH 7,4 tampao PBS; (2) controle positivo - LS mais Peroxido de Hidrogenio 4 mM; testes - composto de LS com 18,5 µM (2,5 µg/mL) ou 37,0 µM (5,0 µg/mL) ou 73,0 µM (10 µg/mL) ou 110 µM (15 µg/mL) ou 147 µM (20 µg/mL) de Zn (Cloreto de Zinco, grau analitico, Merck®, Darmstadt, Alemanha). Todos os grupos de amostras foram incubadas durante 1 hora a 25oC com agitacao lenta e o sentido foi invertido a cada 10 min na sequencia as amostras foram adicionalmente lavadas cinco vezes com tampao de PBS pH 7,4 e centrifugada a 2.000 rpm durante 10 min. a temperatura ambiente. A quantificacao de Zn intracelular nos leucocitos foi realizada usando a analise de ICP-MS. O teor de Zn intracelular foi calculado, considerando-se o numero de 104 celulas/mm cubico de LS, tendo em conta a concentracao de Zn de que as celulas foram expostas e o valor determinado por analise de ICP-MS para a mesma, o que foi assumido como o conteudo de Zn absorvido pelas celulas. Os dados obtidos foram tratados por analise unidirecional da variância (ANOVA), seguido de comparacao multipla pelo teste de Tukey, quando pertinente, aceitando p <0,05. Nossos resultados demonstram que ha um aumento do conteudo intracelular de Zn de forma proporcional a exposicao celular, contudo, o percentual de Zn intracelular decai a medida que se aumenta a concentracao de exposicao, atingindo estabilizacao nas tres ultimas maiores concentracoes. O aumento absoluto de concentracao de Zn relacionado com o aumento da concentracao intracelular de exposicao do metal, sugere que o influxo do metal ocorre sob cinetica de ordem zero.