Dosage des IgE par immunofluorométrie en temps retardé (DELFIA ® ) appliqué au diagnostic d’aspergillose bronchopulmonaire allergique (ABPA) d’une cohorte de patients atteints de mucoviscidose

Objet de l’etude Le diagnostic de l’ABPA chez les patients atteints de mucoviscidose est delicat et repose sur un ensemble d’arguments cliniques, serologiques et radiographiques (Stevens, 2003). De nombreuses etudes tentent d’ameliorer le serodiagnostic en identifiant les proteines immunoreactives avec les IgE et/ou les IgG et en les synthetisant en antigenes recombinants (AgR). Mais leurs efficacites sont variables selon les etudes. Notre laboratoire a produit 5 AgR issus d’ Aspergillus (Millon, 2012) dans le cadre de recherches sur la maladie du poumon de fermier. Quatre d’entre eux ont egalement ete reveles en Western blot puis identifies par spectrometrie de masse avec des serums de patients ABPA par l’equipe de Singh (2010). L’objectif de l’etude etait de developper la technique DELFIA ® pour mesurer le taux d’IgE specifiques, d’Ag somatiques purifies (AgS) d’ A. fumigatus et d’AgR afin d’evaluer les performances diagnostiques de ce nouveau test chez les patients atteints de mucoviscidose et d’ABPA. Methodes Pour la validation de la technique DELFIA ® , 53 serums de patients anonymes ont ete utilises. Et 26 patients atteints de mucoviscidose ont ete collectes, dont 5 ont une ABPA. Les resultats obtenus ont ete compares aux resultats d’immunoCAP M3 (Thermo Scientific) utilise en routine pour la mesure du taux d’IgE specifiques d’ A. fumigatus . Un extrait d’AgS et 5 AgR : NAD-dependant formate deshydrogenase, Glucose-6-phosphate isomerase (G6Pi), Glu/Leu/Phe/Val deshydrogenase, Mannitol-1-phosphate deshydrogenase (Man1P) et Enolase ont ete testes. La technique DELFIA ® est realisee en plaque de 96 puits ou sont fixes les Ag puis par incubations successives : le serum, l’anticorps secondaire liee a une biotine puis la streptavidine couplee a l’Europium. La mesure de la fluorescence est obtenue apres une excitation a 340 nm. Resultats Le test realise avec des AgS d’ A. fumigatus montre une bonne reproductibilite et une bonne correlation avec le resultat d’immunoCAP M3 (Spearman, p-value −6 ). L’AgS, la Man1P et la G6Pi obtiennent des sensibilites superieures a 80 % et des specificites superieures a 73 %. L’utilisation simultanee des AgS d’ A. fumigatus et de la Man1P permet de faire le diagnostic des 5 patients ABPA. Conclusions L’utilisation de la Man1P pour le serodiagnostic de l’ABPA peut apporter l’avantage de la standardisation, cependant l’efficacite du test est amelioree uniquement avec l’utilisation simultanee d’AgS d’ A. fumigatus . Le DELFIA ® est un outil prometteur pour le dosage d’IgE specifiques et apporte l’avantage de pouvoir utiliser de nombreux Ag non disponibles dans le commerce. Recemment nous l’avons utilise afin de mettre en evidence un eventuel role de l’exposition professionnelle dans la survenue d’allergies d’ouvriers travaillant dans des plate-formes de compostage ( n  = 179/6 Ag) et de travailleurs agricoles exposes a de la poussiere de ble ( n  = 291/14Ag).