Etude à l’échelle cellulaire et moléculaire de la synthèse de la mycosubtiline

Cette these a porte sur l’etude de la biosynthese d’un lipopeptide antifongique, la mycosubtiline, produit par Bacillus subtilis ATCC6633 sous la forme d’un melange d’isoformes qui varient selon la longueur et l’isomerie de leur chaine d’acide gras. La nature de l’acide gras influence l’activite biologique du lipopeptide. La correlation entre la synthese des isoformes de mycosubtiline et d’acides gras cellulaires a ete etudiee en faisant varier des conditions de culture telles que l’osmolarite, la temperature et la source d’azote. Les variations du profil d’acides gras influencent dans la majorite des cas le profil des mycosubtilines obtenues confirmant le role important de ces precurseurs pour la synthese du lipopeptide. Les effets de la modification genetique de deux genes intervenant dans la synthese de ces precurseurs ont ete egalement caracterises. La surexpression du gene ilvA codant pour la threonine deshydratase et intervenant donc dans la synthese de l’isoleucine augmente la synthese de la mycosubtiline anteisoC17 alors que l’interruption d’un gene regulateur pleiotropique codY favorise la formation de la forme isoC16. Une souche monoproductrice constitutive de mycosubtiline, obtenue par optimisation genetique de la souche ATCC 6633 a egalement ete caracterisee. Enfin, une premiere approche de purification des synthetases impliquees dans la synthese de la mycosubtiline a ete realisee. Ces etudes ont contribuees a une meilleure comprehension des parametres influencant « in vivo » cette synthese, ainsi qu’a l’amelioration de la production de mycosubtiline, et a la definition des conditions optimales d’obtention des isoformes les plus actives.