Caracterización fenotípica y genotípica de Vibrio cholerae aislada de la laguna de Cajititlán del Estado de Jalisco

Introduccion En los ultimos anos se han visto reportados varios brotes de enfermedades transmitidas por alimentos (ETA) que han sido asociados con el consumo de alimentos contaminados [1]. Las principales bacterias que ocasionan las ETA son Campylobacter, Salmonella, Shigella, STEC no O157, STEC O157 y varias especies de Vibrio [2]. La familia Vibrionaceae cuenta con 35 especies, de las cuales 12 son patogenas en humanos, siendo las principales Vibrio cholerae, parahaemolyticus y vulnificus [3]. Los principales vectores de transmision son el agua potable y animales acuaticos crudos o mal cocinados, siendo Vibrio cholerae la principal bacteria presente en estos debido a su preferencia por ambientes marinos y de agua dulce, con una mayor inclinacion a medios salinos [4]. Existen dos serogrupos de Vibrio cholerae que son toxigenicos, el O1 y el O139, estos producen una enterotoxina, la cual causa el colera. El colera representa una carga estimada de 1,4 a 4,0 millones de casos y de 21 000 a 143 000 muertes por ano en todo el mundo [1]. Vibrio cholerae ha sido aislado en diferentes cuerpos de agua y se ha encontrado una prevalencia de 43%, 62.8% y hasta un 74.5% [5,6,4], representando un riesgo latente para la salud publica. El impacto mas inmediato seria si una persona llega a tener contacto directo con el agua o al consumir algun alimento que haya sido contaminado y desarrolle alguna ETA como es el colera. El objetivo de este estudio fue determinar la presencia de Vibrio cholerae en la laguna de Cajitilan ya que no existen antecedentes que demuestren la presencia de esta especie, consiguiendo asi un mayor conocimiento sobre sus caracteristicas fenotipicas y genotipicas. Metodologia 1. Muestreo. Se realizo en la laguna de Cajititlan del estado de Jalisco. Se realizaron cuatro muestreos en el periodo de junio a septiembre de 2018. Las muestras se tomaron en 5 puntos diferentes de la laguna los cuales se muestran en la figura 1, basandose en los puntos que utiliza la Comision Estatal del Agua (CEA) para monitorear los parametros de calidad del agua de la laguna, se tomaron a tres profundidades diferentes con una botella tipo van dorn y se transportaron a 4˚C para su posterior analisis. Figura 1. Puntos de muestreo. 2. Aislamiento y caracterizacion de V. cholerae spp. Cada muestra fue anadida en un medio de preenriquecimiento (agua petonada + 1% NaCl) y se incubo a 35˚C durante 24 horas. Posteriormente se sembro en agar TCBS y se dejo incubar a 35˚C durante 24 horas. Se tomo una colonia presuntiva (color amarillo) y se coloco directamente sobre el medio de enriquecimiento (caldo de soya tripticaseina + 1% NaCl) dejandose incubar a 35˚C durante 24 ±3 horas. Del medio de enriquecimiento se tomo cultivo, se centrifugo y se realizaron lavados con agua de grado molecular. Se realizo la lisis bacteriana en el bano maria a ebullicion por 5 minutos. 3. Confirmacion por PCR. Se realizo mediante el uso de PCR punto final utilizando los oligonucleotidos OMPW-F y OMPW-R, segun lo descrito por Nandi et al [7]. 4. Electroforesis. Se analizaron las muestras en un gel de agarosa al 1.2% y se utilizo un marcador de peso molecular de 100 pb, esperando el amplicon a 588 pb. Se dejo correr a 90 volts durante 90 minutos y para visualizar los resultados el gel se coloco en un fotodocumentador de luz UV. Resultados y discusion Aislamiento de Vibrio cholerae Se obtuvieron un total de 15 muestras de agua de la laguna, de las cuales se aislaron un total de 173 cepas presuntivas para Vibrio cholerae de los sitios de muestreo CAJ-1, CAJ-2, CAJ-3, CAJ-4 y CAJ-5. Presencia de Vibrio cholerae La presencia de Vibrio cholerae se muestra en la tabla 1, donde podemos observar el sitio de muestreo, el numero de muestras que salieron positivas para este microrganismo ademas de su porcentaje de presencia. Tabla 1. Presencia de Vibrio cholerae en la zona de estudio por sitio de muestreo Sitio de muestreo No. de muestras Porcentaje (%) CAJ-1 32/36 88.8% CAJ-2 31/33 93.9% CAJ-3 35/38 92.1% CAJ-4 33/33 100% CAJ-5 32/33 96.9% TOTAL 163/173 95.9% Los resultados de este estudio muestran la presencia de Vibrio cholerae en la laguna de Cajititlan, con una prevalencia de aproximadamente el 96% en las muestras de agua. De las 173 cepas aisladas se encontraron 60 (100%) en el primer muestreo, 35 (87.5%) en el segundo muestreo, 32 (94.1%) en el tercer muestreo y 36 (92.3%) en el cuarto muestreo (Tabla 2). La presencia en la zona de estudio se puede deber a la capacidad de sobrevivir en diversos cuerpos de agua. Tabla 2. Presencia de Vibrio cholerae por fecha de muestreo Muestreo Fecha de muestreo Presencia de Vibrio cholerae 1 30 de Junio de 2018 60 2 28 de Julio de 2018 35 3 25 de Agosto de 2018 32 4 30 de Septiembre de 2018 36 En la tabla 2, se muestra la presencia de Vibrio cholerae en los diferentes muestreos, donde se encontro una mayor presencia en el mes de junio y disminuyo en los meses de julio y agosto, esto podria deberse a la estacion del ano y a la temperatura, lo que coincide con algunos estudios donde se encontro una mayor presencia de la bacteria en climas calidos [5]. Estos resultados concuerdan con Guardiola-Avila y Martinez-Vazquez, que asilaron 161 cepas de muestras de agua tomadas en el Rio Bravo y dos canales internos que atraviesan la Ciudad de Reynosa. A diferencia de ellos en nuestro estudio se aislo solamente Vibrio cholerae (96%) de las muestras de agua mientras que ellos aislaron Vibrio cholerae (74.5%), Vibrio spp. (1.2%) y Vibrio mimicus (0.6%). Tabla 3. Presencia de Vibrio cholerae a diferentes profundidades Profundidad Presencia de Vibrio cholerae 80 cm - 1.4 m 70/75 (93.3%) 1.5 m - 2.5 m 65/67 (97%) > 3 m 28/31 (90.3%) Vibrio cholerae es una bacteria anaerobia facultativa, por lo cual el oxigeno no es indispensable para su supervivencia. En este estudio se encontro la presencia de Vibrio cholerae con un porcentaje mayor al 90% a las tres profundidades, por lo tanto, se puede decir que las condiciones de crecimiento, de oxigeno, eran optimas para la supervivencia de esta bacteria (Tabla 3). Conclusiones Se puede concluir de este estudio que el agua es una importante fuente de contaminacion debido a que se puede deber al deficiente tratamiento de aguas residuales, pudiendo provocar diferentes enfermedades transmitidas por los alimentos. Asi como se demuestra la presencia de Vibrio cholerae en la laguna de Cajititlan. La informacion obtenida debe ser una pauta para la implementacion de medidas de contencion de la contaminacion y aplicacion de tecnicas analiticas mas modernas, como la PCR, para su deteccion y para tratar de minimizar el riesgo de la presencia de patogenos en el agua y en los alimentos evitando asi las ETAs.