Anticuerpos de cadena única de alpaca para la detección de antígenos de Fasciola hepática

RESUMEN Objetivo. Producir anticuerpos recombinantes de cadena unica de alpaca que se unan con alta afinidad y especificidad al antigeno excretado-secretado (ES) de Fasciola hepatica para el desarrollo de tecnologias nuevas de diagnostico de fascioliasis humana y animal. Materiales y metodos. Se ha construido una genoteca de cADNde los dominios variables de anticuerpos de cadena unica pesada, conocidos como VHH, a partir de celulas mononucleares de sangre periferica de una alpaca inmunizada con el antigeno ES de F. hepatica. La genoteca fue tamizada con el antigeno ES por despliegue diferencial de fagos (phage display), seleccionando diez VHH que se unen especificamente a ES. El VHH anti ES fue clonado en un vector de expresion, la proteina recombinante (VHH-ES1) de 15,3 kDa fue producida por fermentacion en E. coli y purificada a homogeneidad por cromatografia de afinidad. La union del VHH-ES1 al antigeno ES fue evaluada por ELISA usando VHH-ES1 como anticuerpo de captura, antisuero policlonal anti-ES de conejo y conjugado anti IgG de conejo con peroxidasa de rabano. Resultados. Se ha identificado y producido un VHH-ES1 recombinante que se une al antigeno ES (VHH-ES1) que correspondia a un anticuerpo de la subclase IgG2 de bisagra larga. La union del anticuerpo VHH-ES1 al antigeno muestra linealidad respecto a la concentracion de ES en el rango de 50-5000 ng/mL y el valor limite de deteccion del antigeno esta en el rango de 30-170 ng/mL de ES (R2=0,99). Conclusion . El VHH-ES1 se une con afinidad y especificidad al antigeno ES de F. hepatica y es un anticuerpo promisorio a evaluar para el desarrollo de nuevas tecnologias de diagnostico de fascioliasis.