携带GALV.fus基因的重组单纯疱疹病毒的组装、扩增及鉴定

目的：包装已成功构建的受Ⅰ型单纯疱疹病毒（HerpessimplexvirusⅠ,HSV-Ⅰ）晚期表达基因-UL38启动子调控的、嗜肿瘤单纯疱疹病毒介导的,长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白（Gibbon ape leukemia virus membrance fusion glycopratein,GALV.fus）基因质粒（HSV-UL38P-GALV.fus）,无肿瘤特异性巨细胞病毒启动子（Cytomegalovirus promoter,CMVP）GALV.fus质粒（HSV-CMVP-GALV.fus）,GALV.fus基因片段被增强型绿色荧光蛋白（Enhanced green fluorescent protein,EGFP）基因片段所取代的治疗对照质粒（HSV-CMVP-EGFP）,分别命名为Synco-2、Synco-1、Baco-1。方法：扩增已成功构建的HSV-UL38P-GALV.fus、HSV-CMVP-GALV.fus、HSV-CMVP-EGFP质粒,然后分别在Vero细胞用脂质体转染、包装成重组嗜肿瘤单纯疱疹病毒。重组单纯疱疹病毒的扩增及纯化采用Vero细胞及氯化铯纯化常规方法,病毒滴度测定采用TCID50法。Synco-1、Synco-2病毒感染肝癌细胞株HepG2,分别提取受染肝癌细胞HepG2的总RNA,以RT-PCR的方法鉴定GALV.fus基因的表达。结果：成功包装了3种重组单纯疱疹病毒Baco-1、Synco-1和Synco-2,按需要在Vero细胞内扩增后以氯化铯密度梯度离心法进行纯化,TCID50法测得病毒滴度分别为3×1010 pfu/ml1,×1011 pfu/ml和4×1010 pfu/ml。受染肝癌细胞株HepG2中以RT-PCR法检测到GALV.fus基因的表达。结论：成功包装、扩增及纯化3种重组单纯疱疹病毒,受染肝癌细胞株HepG2中以RT-PCR法检测到GALV.fus基因的表达。