GSK-3β特异的siRNA腺病毒对高脂诱导内皮细胞GSK-3β表达的影响

目的构建糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）特异的RNA干扰（RNAi）腺病毒，观察其抑制高游离脂肪酸（FFA）诱导下人脐静脉内皮细胞（HUVEC）GSK-3β的表达情况。方法利用体外同源重组技术构建GSK-3β特异的siRNA腺病毒表达载体，在HEK293A细胞中包装并扩增病毒、空斑以实验法测定病毒滴度。GSK-3p特异的siRNA腺病毒感染HUVEC，以Western印记法测定其对GSK-3β蛋白表达的影响。结果成功构建了GSK-3β特异的siRNA腺病毒，获得高滴度的腺病毒液；构建的重组腺病毒感染HUVEC，可显著抑制正常培养及游离脂肪酸诱导下的细胞的GSK-3β蛋白的表达，Ad—DEST组与Ad-640组比较，Ad-640组明显下降（P〈0．05）。结论构建的GSK3特异的RNAi腺病毒能有效抑制HUVECGSK-3β蛋白的表达，有可能保护高脂诱导的HUVEC损伤。