pGEX-4T-1-Neurexin 1β原核表达载体构建及表达条件的优化

目的：构建Neurexin1p（Nrx1p）原核表达重组体pGEX-4T-1-Neurexin 1β；方法：pGEX-4T-1-Neurexin 1β真核表达载体为模板，经PCR扩增Nnc1βcDNA，然后将其克隆入pGEx-4T-1原核表这载体，筛选阳性质粒后转化入宿主菌BL21，选用ⅢTG进行诱导表达，优化表达条件，SDS—PAGE检测Nrx1B的蛋白表达。结果：琼脂糖凝胶电泳显示Nrx1β的cDNA扩增成功，重组体酶切结果及测序结果与预期结果一致。转化入BL21后在1PTG的诱导TNrx1B成功表达，且在24℃时，IPTG浓度为0.2mmol／L诱导12h后Nrx1p的蛋白表达量最高。结论：该研究成功构建了pGEX-4T-Nrx113原核表达载体，并优化了Nrx1B的蛋白表达条件，为下一步研究该蛋白质的功能奠定基础。