Desarrollo de un inmuno-ensayo enzimático (ELISA) para el diagnóstico de paratuberculosis en bovinos

Los objetivos del trabajo fueron estandarizar y desarrollar un ELISA con antigeno protoplasmatico obtenido de una cepa de Mycobacterium avium paratuberculosis (Map) 3065 de origen ovino, para el diagnostico de paratuberculosis en bovinos. El antigeno se fijo en las placas a concentraciones de 10, 5, 2.5 y 1.25 µg/100 µl y se probaron diluciones de los sueros control positivo y negativo de 1:20,1:40, 1:80 y 1:160. El punto de corte se establecio con un intervalo de confianza del 95 % y dos desviaciones estandar. Para determinar la sensibilidad y especificidad del ELISA se trabajo con 491 sueros de bovinos, asi como tambien, se colectaron muestras de heces para efectuar el aislamiento bacteriologico, y la prueba de reaccion en cadena de la polimerasa (PCR) anidada para la deteccion de Map. Los resultados de las tres pruebas fueron analizadas para determinar la asociacion o concordancia por medio de una prueba de Kappa La concentracion de antigeno y suero que dieron mejor diferencia entre los controles fue de 1.25 µg/100 µl antigeno y la dilucion del suero 1:160, el punto de corte se establecio a una densidad optica de 0.16, la sensibilidad que se obtuvo fue 79.31 %, la especificidad 82.25 % y el indice de concordancia de 0.2763 del ELISA con respecto al cultivo. Los resultados obtenidos permiten recomendar el ELISA con antigeno protoplasmatico de la cepa de Map 3065, como una alternativa para el diagnostico de la paratuberculosis en bovinos.