多重置换扩增（MDA）结合荧光PCR对植入前胚胎进行性别诊断的研究

目的：建立多重置换扩增（MDA）联合荧光PCR对植入前胚胎进行性别诊断的方法,为开展性连锁遗传病的性别筛选提供实验依据。方法：在行IVF-ET助孕的患者中,选取废弃的第3日新鲜或冷冻后的2PN受精胚胎。通过显微操作活检得到单个卵裂球细胞,采用MDA方法对单个/2个卵裂球细胞行全基因组扩增,然后采用荧光PCR方法对AMEL、X22、SRY和XHPRT 4个性染色体相关基因或STR位点进行扩增,对其扩增产物行毛细管电泳检测,分析电泳结果确定植入前胚胎的性别。以父母的外周血单个淋巴细胞作为对照进行分析。结果：①采用蛋白酶K法（n=21）和碱法（n=17）对卵裂球细胞进行裂解行MDA,扩增成功率未见统计学差异（85.7%vs 82.4%,P〉0.05）;单个卵裂球组（n=15）和2个卵裂球组（n=23）MDA扩增成功率亦未见统计学差异（80.0%vs87.0%,P〉0.05）。②利用MDA方法对15个胚胎的单个/2个卵裂球进行扩增,扩增成功率为86.7%（n=13）。13个胚胎中7个为男性,6个为女性,性别检测成功率100%;等位基因脱扣（alleledropout,ADO）发生率为7.7%。结论：PGD中MDA是有效且可靠的全基因组扩增方法,MDA结合荧光PCR可以用于性连锁遗传病的性别筛选、致病基因检测和对胚胎进行HLA分型。