[Effects of adipose-derived stem cell released exosomes on proliferation, migration, and tube-like differentiation of human umbilical vein endothelial cells].

目的: 探讨脂肪干细胞来源外泌体（adipose-derived stem cell released exosomes，ADSC-Exos）对人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）增殖、迁移及管样分化的影响。. 方法: 取吸脂患者自愿捐赠的脂肪组织，采用酶消化法分离培养获得 ADSCs，并行流式细胞检测及成脂诱导鉴定。收集第 3 代 ADSCs 上清液提取外泌体，透射电镜观察其形态，Western blot 检测其膜表面标志性蛋白 Alix 和 CD63，用纳米颗粒跟踪分析仪 NanoSight 分析外泌体粒径分布范围。用 PKH26 荧光标记的 ADSC-Exos 与 HUVECs 共培养后，共聚焦显微镜观察 ADSC-Exos 能否进入 HUVECs。将 ADSC-Exos 与 HUVECs 共培养 1、2、3、4、5 d，CCK-8 法检测 ADSC-Exos 对 HUVECs 增殖影响；共培养 12 h 时 ELISA 法检测细胞上清液 VEGF 蛋白表达量。采用 Transwell 迁移实验检测 ADSC-Exos 对 HUVECs 迁移能力的影响。通过体外 Matrigel 基质胶实验，观察 ADSC-Exos 对 HUVECs 管状结构形成的影响；将 HUVECs 与 Matrigel 基质胶混合后联合 ADSC-Exos 注射在 BALB/c 雄性裸鼠皮下，2 周后检测基质胶中新生血管情况，计算平均血管密度（mean blood vessel density，MVD）。上述实验均以等量 PBS 作为对照。. 结果: 经鉴定所培养细胞符合 ADSCs 的特征。ADSC-Exos 为形态一致的圆形或椭圆形膜性囊泡，表达标志性蛋白 Alix 和 CD63，粒径范围 30～200 nm。共聚焦显微镜观察示 ADSC-Exos 可被 HUVECs 摄取。CCK-8 法检测示，各时间点实验组细胞增殖均优于对照组（ P<0.05）。Transwell 实验结果显示，实验组跨膜迁移细胞数较对照组显著增多（ t=9.534， P=0.000）。在体外 Matrigel 胶成管实验中，实验组管样结构数明显多于对照组（ t=15.910， P=0.000）；在体内实验中，实验组 MVD 亦显著高于对照组（ t=16.710， P=0.000）。ELISA 检测示，实验组细胞上清液 VEGF 蛋白表达量明显高于对照组（ t=21.470， P=0.000）。. 结论: ADSC-Exos 可促进 HUVECs 增殖、迁移及管样结构形成，提示 ADSC-Exos 可促进血管新生。.