人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的分离、体外培养及诱导分化

人羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs）属于成体干细胞,具有来源广、低免疫原性、增殖快等特点.本研究旨在建立hAMSCs的体外分离培养方法,探索其向三胚层分化潜能.无菌条件机械分离人羊膜并剪碎,经过两次胰蛋白酶消化去除上皮细胞后,再用Ⅰ型胶原酶消化分离得到hAMSCs.观察细胞形态,生长规律,染色体分裂中期相;通过二氨基联苯胺（diaminobenzidine staining,DAB）染色、免疫荧光、流式细胞仪、定向诱导三胚层分化和RT-PCR检测等方法进行鉴定.结果表明,从人羊膜中分离得到纯度较高的间充质干细胞,经过免疫组化波形丝蛋白（vimentin） DAB染色呈阳性;免疫荧光检测表面标记vimentin和阶段特异表达抗原4（stage specific embryonic antigens,SSEA-4）均呈阳性;hAMSCs表达CD29、CD49d和CD73表面抗原,不表达CD34、CD45和HLA-DR; RT-PCR检测干细胞特异基因POU5f1转录因子4（octamer-binding transcription factor-4,OCT4）、性别决定基因相关转录因子2（SRY-related high-monility-group（HMG）-box protein-2,SOX2）和NANOG均在mRNA水平上表达;经过免疫组化和RT-PCR检测在体外特定条件下可成功诱导分化为成脂、成骨、神经和胰岛样细胞.结果表明,hAMSCs可在体外分离培养并保持稳定的遗传学特性,不仅具有间充质干细胞特性,还具有向三胚层分化潜能.本研究为组织工程和再生医学的临床应用提供实验基础.