丹毒丝菌 SpaA 基因免疫保护区的克隆及其在毕赤酵母中的表达

目的以毕赤酵母 Pichia pastoris X-33为宿主表达猪丹毒丝菌 Erysipelothrix rhusiopathiae SpaA 基因氨基端的免疫保护区蛋白. 方法以采集于广东某猪场的猪丹毒丝菌为模板, 根据NCBI中已发表的 Spa 基因cDNA序列设计1对引物, 通过PCR扩增得到 SpaA-N , 并将其连接到表达载体pPICZαC上, 得到重组表达质粒pPICZαC- SpaA-N ; 用 Sac Ⅰ酶将重组表达质粒pPICZαC- SpaA-N 线性化后电转化入毕赤酵母X-33, 经含博来霉素 Zencin TM 抗性的YPDS平板筛选和PCR鉴定的阳性转化子, 用含不同浓度博来霉素抗性的YPDS平板筛选出高拷贝子并进行甲醇诱导培养, 分别于诱导48、72、96 h后离心收集上清液, 立即做SDS-PAGE, 并进行SDS-PAGE及Western-blot试验. 结果和结论成功克隆并表达了 SpaA-N 基因, 构建了重组表达质粒pPICZαC- SpaA-N , 并以毕赤酵母X-33为宿主成功表达了猪丹毒丝菌 SpaA 基因氨基端的免疫保护区蛋白.丹毒丝菌 SpaA-N 作为免疫保护区在酵母宿主中得以成功表达.