金银花糖基转移酶基因 LjUGT71E1 的克隆及原核表达

糖基化广泛存在于生物体中，具有非常重要的作用，而糖基转移酶则是催化糖基化反应的关键酶。本研究根据转录组数据库，设计引物从金银花( Lonicera japonica Thunb.)中克隆得到一个糖基转移酶编码基因 LjUGT71E1 ，序列分析表明该基因的CDS为1 503 bp，理论可编码氨基酸数目为501，等电点(pI)预测为5.09，理论分子量为55 579.71 Da。多重序列比对表明LjUGT71E1与其它植物UGT71家族成员在序列上保守性很高，并且其C端具有催化植物次生代谢产物糖基化的糖基转移酶所具有的保守的PSPG-box基序。系统发生分析表明LjUGT71E1与人参( Panax ginseng )和甜叶菊( Stevia rebaudiana )的UGT71E亚家族成员聚为一支。荧光定量PCR分析表明，该基因在金银花的五个花期均有表达，在幼蕾时期相对表达量达到峰值。进一步构建了 LjUGT71E1 基因的原核表达载体并且在大肠杆菌中诱导表达得到重组蛋白，为后续的功能研究提供了基础。