Mda7／IL-24基因的克隆及其融合蛋白在E．coli中的表达

目的：克隆人黑素瘤分化相关基因melanoma differentiation associated gene，mda-7／IL-24)，并在大肠杆菌中表达。方法：从PHA刺激培养的人外周血淋巴细胞提取总RNA，根据mda-7／IL-24基因序列设计引物，用PCR法扩增mda-7／IL-24基因。将mda-7／IL-24基因插入表达载体pET-28a(+)中，构建表达载体pET-28a-mda-7／IL-24，用IPTG诱导目的蛋白在E．coli中表达。通过Western印迹分析对表达产物进行鉴定。结果：经RT-PCR从人外周血分离的淋巴细胞中扩增到mda-7／IL-24cDNA，序列分析与文献报道一致；SDS-PAGE分析表明，经0．5mmol／L IPTG 37℃诱导4h后在E．coli中有大量mda-7／IL-24融合蛋白表达，相对分子质量约为28×103，融合蛋白约占诱导菌总蛋白的30％；Western印迹分析提示，诱导表达产物能与His单抗发生特异性反应。结论：从人外周血淋巴细胞中获得了mda-7／IL-24的全长cDNA，融合蛋白在E．coli中获得高效表达。