Rôle des pompes à efflux et du système de sécrétion de type I dans la résistance et la virulence de Legionella pneumophila

Legionella pneumophila est une bacterie gram/negative de l'environnement qui infecte et se multiplie au sein des protozoaires aquatiques, comme les amibes. Elle peut egalement infecter les macrophages pulmonaires humains, causant une forme severe de pneumonie appelee legionellose (ou maladie du legionnaire). L'importance du Systeme de Secretion de Type IV (SST4) Icm/Dot est clairement demontree, de meme que celle du Systeme de Secretion de Type II (SST2) Lsp. Des etudes bioinformatiques ont suggere l'existence d'un Systeme de Secretion de Type I (SST1), mais aucune etude n'a a ce jour demontre sa fonctionnalite, ni meme un eventuel role dans la virulence. Ce travail consiste a etudier la fonctionnalite et le role dans la virulence d'un SST1 potentiel de L. pneumophila. La fonctionnalite de pompes d'efflux potentielles, possedant une structure tres proche d'un SST1, est egalement investiguee. Des mutants de L. pneumophila invalides pour les genes codant pour ce SST1 potentiel (lssB, lssD et tolC) ont ete construits : ils possedent une virulence fortement attenuee vis-a-vis de plusieurs types de cellules hotes. L'entree dans la cellule est affectee chez ces mutants, bien que le reste du cycle intracellulaire ne soit pas altere. La fonctionnalite de ce SST1 a ete demontree par la secretion de proteines hybrides entre un rapporteur et la proteine RtxA, qui fait partie de la famille des proteines RTX (Repeat/in ToXins), classiquement secretees par des SST1. Enfin, la fonctionnalite de plusieurs pompes d'efflux potentielles a ete demontree : des composes toxiques expulses par ces pompes ont ete identifies, ainsi qu'une pompe majeure (HelA/HelB/HelC). D'autres analyses sont en cours pour caracteriser plus precisement l'importance de ces pompes d'efflux