Caracterización del procesamiento del receptor de muerte DR6

DR6 es un receptor de muerte de la superfamilia TNFR, caracterizada por poseer dominios ricos en cisteina en su region extracelular. DR6 posee cuatro CRDs y una region espaciadora caracteristica de este receptor situada entre los CRDs y la region transmembrana. Al igual que otros DRs, esta descrito que DR6 es capaz de inducir apoptosis, aunque esto depende de la linea celular, asi como de activar a JNK y a NF-kappaB. No obstante, se desconocen las vias de senalizacion que conducen a estas tres respuestas, asi como su regulacion. Recientemente se ha descrito que DR6 es procesado por la metaloproteasa MT1-MMP en celulas tumorales, y en nuestro laboratorio hemos determinado que el receptor expresado por celulas HEK293 transfectadas transitoriamente tambien es procesado proteoliticamente. En este estudio mostramos que el procesamiento de DR6 exogeno en las celulas HEK293 es parcialmente inhibido por GM6001 (un inhibidor general de metaloproteasas) a concentraciones hasta 10 veces mas altas de las normalmente utilizadas. Ademas, si bloqueamos la activacion de la metaloproteasa MT1-MMP mediante el inhibidor de furina II, no se detecta inhibicion del procesamiento de DR6. Mediante RT-PCR demostramos que las celulas HEK293 no expresan MT1-MMP, confi rmando que esta metaloproteasa no esta implicada en el procesamiento de DR6 en estas celulas. La delecion de la region espaciadora (aa 239-345) genera un receptor que no sufre procesamiento y que es funcional, ya que se comporta de forma similar al receptor completo en cuanto a la activacion de JNK y NF-kappaB. Tambien mostramos que DR6 endogeno es procesado en las celulas de carcinoma de pulmon A549 mediante un proceso que es dependiente de TNF, sin que se observe un aumento en la expresion ni del receptor ni de la MT1-MMP.