LFA-1-/-小鼠脾脏磁珠分选的CD4＋、CD62L＋naive+T细胞体外向iTreg/TH17细胞分化的可塑性研究

目的观察磁珠分选的LFA-1基因敲除小鼠（LFA-1-/-）CD4＋、CD62L＋naive T细胞在不同刺激因素下向CD4＋Foxp3＋调节性T细胞（iTreg）及CD4＋IL17A＋细胞（TH17）之间转变的可塑性。方法采用LFA-1-/-C57/B6小鼠，免疫磁珠分选小鼠脾脏单个核细胞CD4＋CD62L＋naive T细胞并检测纯度，分选的naive T细胞完全培养基重悬后置于抗体包被的96孔细胞培养板中，分为iTreg组、TH17组（分为加IL6亚组、加IL6及IL23亚组）。其中iTreg组培养体系中添加重组小鼠IL2300U/ml，重组人TGFβ30ng/ml，TH17两亚组分别添加重组小鼠IL630ng/ml，重组人TGFβ3ng/ml及重组小鼠IL2330ng/ml、IL630ng/ml、重组人TGFβ3ng/ml，将96孔培养板置于37℃温箱培养90~108个小时，流式检测Foxp3＋/CD4＋T及IL17A＋/CD4＋T，荧光定量PCR检测分选细胞在不同刺激因素诱导下转录因子Foxp3mRNA及RORγtmRNA表达的变化。结果磁珠分选CD4＋、CD62L＋naiveT细胞纯度高于95%，分选出的naiveT细胞在IL2和TGFβ作用下能诱导出iTreg细胞，其特异性转录因子foxp3mRNA表达升高，而加入TGFβ和IL6或IL23作用下可诱导出TH17细胞，其特异性转录因子RORγtmRNA表达升高。结论 LFA-1-/-小鼠的CD4＋、CD62L＋naive T的诱导分化具有可塑性，在不同刺激因素作用下可实现iTreg和TH17细胞之间的诱导转变。