牛胎儿成纤维细胞(bEFs)中过表达SET和MYND结构域蛋白3基因(SMYD3)对细胞增殖和诱导性多能干细胞(iPSCs)诱导效率的影响

SET和MYND结构域蛋白3（SET and MYND domain-containing protein 3,SMYD3）是一种组蛋白H3赖氨酸残基4（Lysine 4,K4）三甲基化转移酶（H3K4 trimethyltransferase）,其在多种癌细胞中高表达,能够促进癌细胞增殖、迁移和侵袭。为研究SMYD3在牛胎儿成纤维细胞（bovine embryonic fibroblast cells,b EFs）中的作用,以牛（Bos taurus）c DNA为模板,PCR扩增牛SMYD3基因CDS,并将其连接到巨细胞病毒（Cytomegalovirus,CMV）启动子表达载体p IRES2-Zsgreen1上,构建高表达SMYD3基因载体p SMYD3-IRES2-Zsgreen1。表达载体转染b EFs后,q RT-PCR和Western blot检测其表达,噻唑蓝（3-（4,5）-dimethylthiahiazo（-z-y1）-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT）比色法监测其对细胞生长的影响。用鼠（Mus musculus）源POU5f1转录因子（octamer-binding transcription factor 4,Oct4）、性别决定基因相关转录因子2（SRY（sex determining region Y）-box 2,Sox2）、鸟类骨髓细胞瘤元癌基因同源基因（avian myelocytomatosis viral oncogene homolog,c-Myc）和Kruppel样因子4（Kruppel-like factor 4,Klf4）诱导高表达SMYD3基因的b EFs,研究SMYD3对b EFs诱导效率的影响。酶切鉴定结果表明,表达载体p SMYD3-IRES2-Zsgreen1构建成功;q RT-PCR和Western blot结果显示,SMYD3能够在b EFs正常表达,通过荧光筛选得到了稳定表达SMYD3基因的b EFs p SMYD3。MTT结果显示,SMYD3能够促进b EFs的生长;转录因子诱导p SMYD3细胞后,与对照组相比,细胞克隆形成率明显提高,且克隆均为OCT4、NANOG同源框（nanong homeobox,NANOG）和SOX2染色阳性,说明SMYD3能够促进诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cells,i PSCs）诱导效率。本研究表明SMYD3对b EFs的生长有促进作用,并且能够提高b EFs向i PSCs的诱导效率,为牛诱导干细胞制备及机理研究提供新的思路。