Charakterisierung von CAR-Promotorpolymorphismen in Mausstämmen

Einleitung: Fasten oder PPARα-Agonisten induzieren den nuclearen Rezeptor CAR (NR1I3) und verstarken die Expression CAR-regulierter Gene, die die Energiehomoostase steuern. In PPARα-/-129/SV-Mausen ist die fastenabhangige CAR-Induktion aufgehoben, die basale CAR-Expression normal. In PPARα-/- C57BL/6J hingegen ist die basale CAR-Expression im Vergleich zum Wildtyp verstarkt. Daher sollten die CAR-Promotoren der Mausstamme vergleichend charakterisiert werden. Methoden: C57BL/6J- und 129/SV-Maushepatozyten sowie mit Reportergenkonstrukten unter Kontrolle des CAR-Promotors der Mausstamme transfizierte Rattenhepatozyten wurden±Phenobarbital,±PPARα-Agonist kultiviert, die Transkriptionsrate der CAR-mRNA mittels qPCR quatifiziert und die Reportergenaktivitat bestimmt. Ergebnisse: In Hepatozyten aus C57BL/6J-Mausen induzierten PPARα-Agonisten CAR weniger stark als in 129/SV-Hepatozyten, wohingegen das prototypische PPARα-Zielgen CPT1 in beiden Fallen gleich stark exprimiert wurde. Der CAR-Aktivator Phenobarbital induzierte die CAR-Expression in den C57BL/6J- starker als in 129/SV-Hepatozyten. In beiden Mausstammen verstarkte Phenobarbital die PPARα-abhangige CAR-Expression. Die gemeinsame Induktion war in beiden Stammen gleich stark. Der CAR-Promotor von 129/SV- und C57BL/6J-Mausen enthalt 2 DR1-Motive als PPARα-Bindungstellen im Bereich bis -943 bp. Der Promotor von 129/SV-Mausen enthalt 5´ ein 216 bp Insert mit einem zusatzlichen DR1-Motiv, das in C57BL/6J-Mausen fehlt. Reportergenassays mit Konstrukten, in denen die DR1-Motive einzeln und in Kombination deletiert waren, zeigten, dass das beiden Mausstammen gemeinsame DR1-Motiv bei -943 bp fur die PPARα-abhangige CAR-Induktion notwendig war und das 129/SV-spezifische DR1-Motiv bei -1322 bp die PPARα-abhangige CAR-Induktion nicht verstarkte. Diskussion: Offensichtlich ist das DR1-Motiv im Insert des CAR-Promotors in 129/SV-Mausen nicht fur die von C57BL/6J unterschiedliche PPARα-abgangige CAR-Expression verantwortlich. bp Basenpaare, CAR Constitutiver Androstan Rezeptor, CPT1 Carnitin- Palmityltransferase 1, DR direkte Wiederholung, PPARα Peroxisomen-Proliferator aktivierter Rezeptor, qPCR quantitative Polymerasekettenreaktion Literatur: Wieneke et al. 2007, Martin et al. 2007