Optimización de un sistema de traducción in vitro derivado de placenta humana para la evaluación de antibióticos.

Un sistema de traduccion in vitro derivado de placenta humana es una herramienta util para estimar el efecto que tendrian antibioticos nuevos sobre la sintesis de proteinas en celulas humanas. Una modalidad simple de ensayo in Vitro es la sintesis de polifenilalanina o poli(Phe), dependiente del ARN sistetico poli(U). Para optimizar este ensayo, se purifico ARNtPhe homologo, partiendo de ARNt total de placenta, mediante una combinacion de cromatografia hidrofobica y de alta presion en fase reversa (RP-HPLC). Al incorporar el ARNTPhe purificado a los ensayos se duplico la eficiencia de sintesis de polo(Phe) con respecto a la obtenida con un ARNt total heterologo de levadura. El sistema de ensayo optimizado fue usado para determinar el efecto de antibioticos sobre la elongacion de polipeptidos por ribosomas humanos. La actividad ribosomal eucariota (ciclo-heximida y emetina, IC50 ˜= 40-60 µmol/L y 10-30 µmol/L, respectivamente). Por el contrario, antibioticos que actuan sobre el ribosoma bacteriano (cloranfenicol, azitromicina, y clindamicina) no mostraron efecto inhibitorio aun a concentraciones altas (hasta 1 mmol/L). Estos resultados demuestran la sensibilidad diferencial esperada del sistema in vitro y su potencialidad para ser utilizado en una evaluacion temprana y rapida del efecto de antibioticos de nueva generacion sobre la sintesis de proteinas con ribosomas humanos. Por lo tanto, el sistema de ensayo in Vitro permitiria seleccionar aquellos compuestos con mejores posibilidades para las pruebas posteriores necesarias para establecer su uso terapeutico en humanos(AU)