Optimisation de la biosécurité du vecteur transposon piggyBac pour le transfert de gène : utilisation des ARN messagers et des insulateurs.

Les progres en biotechno]ogie ont permis le developpement d’outils pour le transfert de gene integratif en transgenese, bioproduction et therapie genique. Cependant, trois challenges majeurs doivent etre releves pour garantir un systeme securise : l’innocuite et l’efficacite du transfert, l’integration ciblee et controlee dans le genome, le niveau et la duree d’expression du transgene au cours du temps. Dans ce but, mes travaux de these ont consiste a tester des solutions pour ameliorer la biosecurite du transposon piggyBac qui necessite un plasmide porteur du gene d’interet a inserer dans le genome et une source de transposase catalysant la reaction d’integration du transgene. Une des strategies de ma these repose sur l’apport de la source de transposase sous forme d’ARN messager au lieu d’ADN afin d’ameliorer la stabilite de l’integration et de reduire les effets genotoxiques en limitant la transposase dans les cellules. Pour la premiere fois, la biodisponibilite de l’ARNm de la transposase et les conditions optimales d’utilisation en cellules humaines ont ete determinees pour augmenter la biosecurite du systeme. Le second objectif de mes travaux consiste a ameliorer l’expression du transgene en ajoutant des insulateurs connus pour s’opposer a l’extinction de l’expression des genes. En termes de biosecurite, cette strategie permet de reduire le nombre de copies du transgene necessaires pour obtenir une expression suffisante. Deux candidats ont ete identifies pour ameliorer l’expression du transgene. La combinaison des approches ARNrn et insulateurs est prometteuse pour securiser le transfert de gene medie par piggyBac et pour maintenir l’expression du gene d’interet.