不同次数移植 BMSCs 修复脊髓损伤的比较研究

目的 观察经蛛网膜下腔不同次数移植的 BMSCs 在 Wistar 大鼠损伤脊髓内的存活、迁移及对大鼠脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）修复的作用，探讨 BMSCs 移植的最佳次数。  方法 8 只 2 月龄 Wistar 大鼠，体重约120 g。取股骨骨髓体外分离培养第 2 代 BMSCs，用 Hoechst 33342 标记。另取 75 只成年 Wistar 大鼠体重约 220 g，采用改良Allen法制备T9、 10 SCI模型。随机分为5组（n=15）， A组经蛛网膜下腔置管移植1次1 × 107个/mL BMSCs悬液0.1 mL（术后 1 周）， B 组 2 次（术后 1、 3 周）， C 组 3 次（术后 1、 3、 5 周）， D 组 5 次（术后 1、 3、 5、 7、 9 周）， E 组于术后 1、 3、 5、 7、9 周各注入 0.2 mL PBS 作为空白对照。SCI 术后不同时间点行大鼠后肢 Basso-Beattie-Bresnahan（BBB）评分评价神经功能状况，并行荧光显微镜、 HE 染色、免疫组织化学染色观察 BMSCs 在体内迁移、存活及分化情况。  结果 术后 3 周，A ～ D 组 BBB 评分均有明显增加，与 E 组比较差异均有统计学意义（P lt; 0.01）。术后 7、9、12 周，C、D 组 BBB 评分均明显高于 A、B 组（P lt; 0.01），B 组高于 A 组（P lt; 0.01）。各时间点 C、D 组间比较差异均无统计学意义（P gt; 0.05）。荧光显微镜观察示术后 3 周，移植的 BMSCs 存活于损伤脊髓边缘， A 组细胞数达高峰；随后 A 组细胞数逐渐减少， B、 C、 D 组分别于术后5、 7、 7周细胞数达高峰后逐渐下降。12周C、 D组存活细胞数显著多于A、 B组，差异有统计学意义（P lt; 0.01）；各时间点C、 D组间比较差异均无统计学意义（P gt; 0.05）。 HE染色示术后3周损伤脊髓形成的空洞A、 B、 C、 D组逐渐减小，12 周 C、 D 组空洞最小， A、 B 组次之， E 组最大。免疫组织化学染色示神经丝蛋白 200（neuroflament 200， NF-200）细胞数变化趋势与 BMSCs 存活细胞数类似。术后 12 周 NF-200 阳性细胞数在 C、D 组表达较 A、B 组明显；神经元样细胞发出的神经丝穿过损伤区在C、 D组最明显， A、 B组较少。 结论 多次移植BMSCs更有利于SCI修复，移植以3次为最好。