化学合成microRNA-29a inhibitors和mimics对SD大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的影响

目的探讨微小RNA-29a（miR-29a）inhibitors和mimics对大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的影响。方法 取SD大鼠心肌组织,以组织块酶消化法分离细胞,通过差速贴壁离心法收集、培养SD大鼠心肌成纤维细胞。应用Lipo-fectamineTM2000Reagent分别向大鼠心肌成纤维细胞瞬时转染miR-29ainhibitors和miR-29amimics24h和48h后,实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-29a、Ⅰ型胶原前胶原A1（Col1A1）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的RNA水平的表达,MTT法检测细胞增殖活性。结果 与正常对照组和阴性对照组比较,在瞬时转染miR-29ainhibitors的心肌成纤维细胞中,miR-29a的表达水平下调;而在转染miR-29a mimics的心肌成纤维细胞中,miR-29a的表达水平上调。Col1A1在miR-29ainhibitors组中表达水平升高,而在miR-29amimics组中则表达水平降低。α-SMA在miR-29ainhibi-tors组中表达水平升高,在miR-29amimics组中则表达水平降低。瞬时转染miR-29amimics24、48h后,与空白对照组和其阴性对照组相比较,心肌成纤维细胞活力明显下降;而瞬时转染miR-29ainhibitors24、48h后,心肌成纤维细胞活力则明显增强。结论 miR-29amimics可明显抑制心肌成纤维细胞增殖活性,而miR-29ainhibitors则显著提高心肌成纤维细胞的增殖活性,提示心肌纤维化的形成可能与miR-29a表达下调有关,其潜在的分子作用机制有待进一步研究。