Rapid and cost-effective method for micro-organism enumeration based on miniaturization of the conventional plate-counting technique

La methode classique de denombrement des micro-organismes apres culture en milieu gelose est toujours tres utilisee dans les laboratoires de microbiologie. Elle est cependant couteuse en temps et devient fastidieuse pour des etudes mettant enjeu un grand nombre d'echantillons et/ou necessitant de nombreuses repetitions. Nous avons developpe une methode miniaturisee basee sur le meme principe que la methode classique mais utilisant des plaques 96 puits pour la phase de dilution decimale des echantillons et des plaques 24 puits pour la phase d'ensemencement des dilutions dans l'agar, ceci permettant le traitement d'un grand nombre d'echantillons en gardant la meme facilite de comptage et d'interpretation des colonies. La fiabilite, la sensibilite et la reproductibilite de cette methode miniaturisee ont ete verifiees en utilisant la technique conventionnelle comme reference pour des denombrements de cellules d'Escherichia coli soumises a un traitement thermique sublethal, de bacteries lactiques au cours de la fermentation du lait en yaourt et de la flore mesophile, des coliformes totaux et de Staphylococcus aureus dans des aliments. Aucune difference significative n'a ete mise en evidence entre les resultats obtenus par les deux methodes, quels que soient les bacteries et le milieu de culture. Cette micromethode de denombrement apres culture en milieu gelose permet donc des reductions de cout et de temps de manipulation avec la meme fiabilite que la methode classique. Elle peut donc etre utile pour toutes les experiences impliquant une gamme etendue de concentrations bacteriennes ainsi qu'un grand nombre d'echantillons et de repetitions.