猪乳铁蛋白N叶（PLF-N）在毕赤酵母中的表达及抑菌活性鉴定

根据猪乳铁蛋白N叶（PLF-N）的蛋白序列和毕赤酵母（Pichia pastoris）密码子的偏嗜性,通过全基因合成法合成改造后的PLF-N基因片段,将其克隆到pGAPZα-A质粒中构建分泌型重组酵母表达载体pGAPZα-A-PLF。pGAPZα-A-PLF通过限制性内切酶AvrⅡ酶切线性化后,经电穿孔法转入毕赤酵母细胞SMD1168内。PCR检测结果发现,PLF-N基因与毕赤酵母染色体稳定结合,Zeocin抗性筛选,得到高拷贝转化子。在GAP启动子调控下,PLF-N重组蛋白获得分泌表达,其分子质量约为38ku,上清表达量约为364μg/mL。琼脂糖孔穴扩散法检测结果显示,该表达产物对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均具有较好的抑菌活性,且对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度（MIC）分别为12.5、25.0μg/mL。