Identificazione di specie di microbatteri mediante tecniche molecolari di PCR e RFLP

L'identificazione dei microbatteri a livello di specie effettuata attraverso i convenzionaoli tests biochimici e colturali richiede tempi lunghi, oltre ad essere laboriosa. Il D.M. n°592 del 15 Dicembre 1995 indica il saggio PCR tar le prove ammesse per la diagnosi di tubercolosi, ma non fornisce indicazioni dettagliate sul tipo di protocollo da utilizzare. Scopo di questa ricerca e stato, pertanto, la messa a punto di una tecnica rapida e di semplice interpretazione per la tipizzazione di ceppi microbatterici. La ricerca e stata svolta utilizzando principalmente le due tecniche molecolari PCR e RFLP al fine di riuscire a caratterizzare delle variazioni geniche specie-specifiche all'interno della sequenza genomica microbatterica codificante per la heat shock protein (hsp65). Il gene, lungo complessivamente circa 1650 pb, e stato interamente amplificato, sequenziato e analizzato con gli enzimi di restrizione Bst Ell e HAe III.