CE-LIF方法对重组人促红细胞生成素中 N -寡糖的快速分析

目的建立毛细管电泳-激光诱导荧光检测（CE-LIF）的方法对重组人促红细胞生成素（recombinant human erythropoietin，rhEPO）的N-寡糖进行快速分析。 方法以N-糖苷酶酶切rhEPO样品，采用磁珠辅助法收集酶切下来的N-寡糖，以APTS对酶切下来的N-寡糖进行荧光标记，利用CE-LIF实现分离检测，通过GU数据库进行糖型鉴定。CE-LIF条件采用未涂层熔融石英毛细管（有效长度20 cm，总长度30 cm，内径50 μm），电迁移进样，电压设为-2 kV，进样时间2 s；毛细管分离温度设为25℃，毛细管分离电压为-30 kV，分离时间5.5 min；LIF检测器的激发波长及发射波长分别为488 nm和520 nm。 结果新建方法在60 min内完成样品前处理，5 min内完成分离分析检测；FA2BG2S2、FA2（3）G1S1和A2B 3个峰的迁移时间的RSD均小于0.2%，校正峰面积百分比RSD均小于2.6%（n=5）。 结论本研究建立的CE-LIF快速糖分析法高效快速，重复性好，可对糖型进行实时鉴定，适用于rhEPO制品的N-寡糖分析。