Estudo do envolvimento da enzima formil-transferase na biossíntese do LPS da Brucella abortus e avaliação da persistência e proteção de uma linhagem mutante para este gene de camundongos C57BL/6 e defifientes para IRF-1

Os membros do genero Brucella sao bacterias Gram-negativas, intracelulares facultativas que podem causar infeccoes cronicas em mamiferos. Varias tentativas tem sido feitas com o objetivo de se obter uma vacina eficaz para esta doenca. No entanto, apesar de conferir protecao, as vacinas comerciais atualmente disponiveis apresentam desvantagens, tais como a interferencia no diagnostico de animais infectados e resistencia a antibioticos. Considerando LPS Brucella de um dos seus principais fatores de virulencia, nos interrompemos o gene wbkC da Brucella abortus, que esta relacionado com a biossintese do seu LPS. Mais especificamente, o gene wbkC catalisa a conversao de GDP-4-NH2-4,6 dideoximanose em GDP-4-formamido-4,6 dideoximanose, que e a unidade monomerica do antigeno-O presente no LPS da Brucella. Neste trabalho foram gerados mutantes pela estrategia de recombinacao homologa dupla para a linhagem selvagem Brucella abortus S2308 vacinal e S19. Nas analises in vitro realizadas em macrofagos de medula ossea, foram observadas alteracoes na sobrevivencia e trafico intracelular dos mutantes em comparacao com as linhagens parentais. Tambem foram realizados experimentos in vivo em camundongos C56BL/6 e knockout para IRF-1 (fator regulador de interferon-1). As linhagens mutantes wbkC apresentaram uma menor persistencia em ambos os modelos murinos analisados, mostrando o papel fundamental deste gene na virulencia da Brucella abortus. Experimentos de protecao revelaram que as linhagens mutantes wbkC induziram uma menor imunidade protetora em camundongos C56BL/6 quando comparados a linhagem vacinal lisa S19, no entanto o mutante AwbkC S2308 mutante apresentou o mesmo nivel de protecao observado para a cepa da vacina rugosa RB51.