P.11 - Etude moléculaire des altérations génétiques dans le cancer colorectal héréditaire

Introduction Le syndrome HNPCC (« Hereditary non polyposis colorectal cancer »), constitue un modele se pretant bien a l’etude des alterations genetiques moleculaires accompagnant le developpement du cancer colorectal (CCR). La mise en evidence d’alterations genetiques pourrait avoir des retombees sur le diagnostic, le pronostic et le suivi de la maladie. Dans ce travail nous avons examine l’instabilite microsatellitaire de l’ADN chez des patients presentant un CCR dans le cadre d’un syndrome HNPCC et cherche les mutations dans le gene MSH2, gene etant implique dans la reparation des erreurs d’appariement de l’ADN. Materiels et Methodes Etude prospective colligeant 6 prelevements de sang et biopsies de tumeurs chez des patients âges de moins de 50 ans ayant un CCR. L’ADN normal a ete extrait a partir des leucocytes peripheriques et l’ADN tumoral a partir des tissus paraffines d’archive. La recherche d’instabilite microsatellitaire (MSI) a ete realisee par PCR multiplexe des marqueurs microsatellites Bat 25, BAT40, NR21, NR22, NR24, suivie par l’analyse des amplicons par electrophorese capillaire automatique. La detection de polymorphismes a ete faite par Single Strand Conformation Polymorphism (SSCP) sur les amplicons. L’expression du gene MSH2 a ete etudiee par immunohistochimie et la recherche de mutations dans les 16 exons de ce gene a ete faite par sequencage des amplicons. Resultats Les resultas de l’analyse moleculaire nous ont permis de distinguer 3 phenotypes tumoraux : le phenotype a microsatellites hautement instables ou MSI-High (MSI-H), le phenotype a instabilite faible ou MSI-Low (MSI-L) et le phenotype a microsatellites stables (MSS). L’immuno-histochimie nous a indique que le gene MSH2 n’etait exprime que dans les tumeurs a microsatellites stables. Le sequencage du gene MSH2 a revele la presence, chez un patient a MSI-H, d’une mutation (2427insG) germinale a l’etat heterozygote au niveau de l’exon 14, dont l’effet consiste en l’apparition d’un codon stop premature resultant en un produit tronque. Deux poly-morphismes distincts ont aussi ete notes au niveau des introns 10 (IVS10+12 G > A) et 11 (IVS11-61 A > G). Conclusion Ces resultats, confrontes aux donnees de la litterature, confirment l’interet de l’etude du gene MSH2 par sequencage et immunohistochimie, et l’analyse de l’instabilite des microsatellites, pour distinguer differents types moleculaires de tumeurs HNPCC.