Využití metody HPLC pro detekci polymorfizmu Val158Met genu proCOMT

DNA diagnosticke metody v poslednich letech zaznamenavaji prudký vývoj a zaroveň posun do oblasti automatizace. Jednou z metod, ktere lze využit pro automatizovanou detekci polymorfizmů DNA je metoda HPLC. Amplifikovana DNA je buď nejprve stěpena restrikcnim enzymem nebo v připadě delkoveho polymorfizmu je amplifikovana DNA přimo použita pro HPLC detekci. Jako nejvhodnějsi kolona pro HPLC detekci polymorfnich useků DNA je iontoměnicova kolona plněna neporezni matrici, na ktere je kovalentně navazana faze diethylaminoethylove zbytky, ktere matrici udileji kladný naboj. K vymyti DNA z kolony se použiva gradient chloridu sodneho, kdy chloridove ionty postupně vytěsni navazane molekuly DNA. Tato metodika výrazně usnadňuje, urychluje a zlevňuje detekci DNA polymorfizmů ve srovnani s detekci na agarozových nebo polyakrylamidových gelech, navic pak umožňuje vylouceni prace s toxickými latkami jako jsou ethidium bromid nebo akrylamid.