Effets antiinflammatoires des lymphocytes irradiés par les rayons UV: induction d'IL-1Ra et d'IL-10 par les monocytes macrophages

Par leur capacite de moduler la reponse immune, les rayons ultraviolets (UV) ont trouve des applications dans le traitement de diverses maladies immunes. Leurs mecanismes d’action sont encore incompletement definis. L’un d’entre eux comporte l’induction de cytokines immunosuppressives et antiinflammatoires. Ce processus peut etre provoque par la phagocytose de corps apoptotiques, l’apoptose constituant une des lesions cellulaires elementaires provoquee par les UV. Le but de notre travail a ete de preciser les cytokines impliquees dans la reponse aux UV, de definir certains mecanismes de leur production et de la potentialiser par des agents pharmacologiques.Notre etude a comporte deux parties: (1) l’une in vivo chez des malades souffrant de GVH chronique resistante aux traitements conventionnels et traites par photochemotherapie extracorporelle, procedure dans laquelle les leucocytes du malades, preleves par leucapherese puis traites par un psoralene et par UVA lui sont finalement reinjectes; (2) l’autre in vitro ou des PBMC de volontaires sains ont ete irradies avec 10J/m2 de rayons UVC qui ne necessitent pas de photosensibilisation par psoralene. Deux cytokines, l’IL-10 et l’IL-1Ra ont ete evaluees par RT-PCR dans un systeme de coculture autologue entre PBMC et PBL rendus apoptotiques par irradiation. L’evolution du processus apoptotique declenche par les UV a ete mesuree par cytometrie de flux. Celui-ci concernait essentiellement les lymphocytes, les monocytes/macrophages revelant une resistance relative a l’apoptose, il etait progressif, culminant entre la 24eme et la 48eme heures. Lors des cocultures entre PBMC et PBL irradies, un accroissement tres significatif du nombre de copies d’ARNm, concernant les deux cytokines etudiees, l’IL-10 et l’IL-1Ra etait observe. L’induction d’IL-1Ra etait dependante de l’IL-10. Une preactivation par du LPS etait necessaire pour la revelation du phenomene. Ensuite, nous avons evalue l’implication sur la synthese de cytokines du processus de phagocytose de lymphocytes rendus apoptotiques par irradiation UV et divers moyens pharmacologiques pour la potentialiser. La preincubation du materiel irradie pendant une nuit (16h) a 37° dans le but d’accroitre la proportion de cellules en voie d’apoptose avant mise en contact avec les PBMC a permis d’obtenir un accroissement tres marque sans necessiter de LPS, portant essentiellement sur la production d’IL-1Ra tant sur l’ARNm que la proteine secretee; l’induction d’IL-10 etait cette fois negligeable. L’implication de la phagocytose dans le processus a ete demontree par deux agents bloquants (a) l’anticorps monoclonal anti-CD36 (corecepteur avec l’integrine V3 de la thrombospondine) activant la production d’IL-1Ra et mimant par ce fait le processus phagocytaire et (b) la cytochalasine E la bloquant.Nous avons teste diverses substances pharmacologiques dont l’action activatrice de l’IL-1Ra est connue, en l’occurrence les immunoglobulines G a usage IV (IgIV) et le GM-CSF. L’adjonction d’IgIV (1mg/ml) ou GM-CSF (10 ng/ml) une heure apres le debut de la coculture exerce sur la secretion d’IL-1Ra un effet additif avec les UV. Selon la concentration utilisee, les IgIV peuvent agir par deux mecanismes. Outre l’effet d’activation macrophagique lie au recepteur Fc, nous avons demontre a haute concentration un mecanisme nouveau, du a la presence dans les IgIV d’anticorps naturels antiFas induisant l’apoptose des lymphocytes. Une incubation de 16h des lymphocytes avec 25 mg/ml d’IgIV avant mise en culture provoque outre une apoptose importante une augmentation significative de l’IL-1Ra. Dans ce cas, le processus est independant du fragment Fc, la fraction F(ab’)2 gardant la capacite d’induire l’apoptose et de provoquer la production d’IL-1Ra. En conclusion, nous avons mis en evidence un mecanisme nouveau d’induction d’IL-1Ra, non decrit auparavant et defini diverses modalites qui pourraient accroitre sa production: - L’incubation de 16h du materiel irradie permet d’orienter le systeme en accroissant la production de l’IL-1Ra sans que la production de l’IL-10 soit modifiee et sans necessiter de LPS. Nous attribuons cet effet a l’accroissement du processus apoptotique qui en resulte.- Nous avons potentialise la production d’IL-1Ra par deux agents pharmacologiques, le GM-CSF et les IgIV. Les mecanismes d’action des IgIV dependent de la concentration utilisee.1. Aux concentrations de l’ordre de 1mg/ml, les IgIV exercent, avec les UV un effet additif sur l’induction d’IL-1Ra par une action dependant du fragment Fc. 2. Aux concentrations elevees de 25mg/ml, un effet apoptotique attribuable a l’action d’anticorps anti-Fas agonistes est observe. Une preincubation de 16h de lymphocytes avec cette concentration d’ IgIV avant mise en culture avec les PBMC autologues provoque outre l’apoptose importante des lymphocytes un accroissement significatif de la production d’IL-1Ra. Le processus est independant du fragment Fc, la fraction F(ab’)2 gardant la capacite d’induire l’apoptose et la production d’IL-1Ra. \