Evaluación de métodos de extracción de ADN de hojas de tomate secas y congeladas para detección de Begomovirus por PCR

Seis protocolos de extraccion de ADN para hojas de tomate [Solanum lycopersicum (Mill)] secas y congeladas fueron evaluados para la determinacion de begomovirus utilizando la reaccion en cadena de polimerasa (PCR). La comparacion de los metodos de extraccion se baso en la cantidad y calidad del ADN, costo de extraccion y tiempo de procesamiento. Fueron evaluadas cuatro muestras de hojas de tomate secas y congeladas, recolectadas en los estados venezolanos de Zulia, Merida y Tachira. La concentracion de ADN y la relacion de absorbancias a 260 y 280nm fueron determinadas por espectrofotometria. La deteccion de begomovirus se llevo a cabo utilizando cebadores degenerados para los componentes virales A y B (ADN-A y ADN-B), y la intensidad de las bandas de PCR se Seis protocolos de extracao de DNA para folhas de tomate [Solanum lycopersicum (Mill)] secas e congeladas foram avaliadas para a determinacao de begomovirus utilizando a reacao em cadeia de polimerase (PCR). A comparacao dos metodos de extracao se baseou na quantidade e qualidade do DNA, custo de extracao e tempo de processamento. Foram avaliadas quatro amostras de folhas de tomate, secas e congeladas, colhidas nos estados venezuelanos de Zulia, Merida e Tachira. A concentracao de ADN e a relacao de absorvâsncias a 260 e 280nm foram determinadas por espectrofotometria. A deteccao de begomovirus foi realizada utilizando cevadores degenerados para os componentes virais A e B (DNA-A e DNA-B), e a intensidade das bandas de PCR se registrou usando uma escala visual. O registro usando una escala visual. El metodo SDS produjo mayor cantidad y calidad de ADN, y es mas economico y rapido que los otros protocolos de extraccion ensayados. El ADN-B de begomovirus fue mas consistente en la amplificacion que el ADN-A, sugiriendo una mayor variabilidad del componente A. Los pellets de ADN resuspendidos minimizaron los efectos de inhibidores en la amplificacion debido a la alta sensibilidad de la tecnica de PCR, lo que tambien permitio la deteccion de begomovirus, incluso utilizando pequenas cantidades de tejido de hojas secas y congeladas. El ADN aislado por el metodo SDS provee una opcion sencilla y economica para la deteccion de begomovirus en tomate usando PCR, y podria ser empleado para estudios epidemiologicos de gran escala.