Biosynthèse de l'ubiquinone : étude biochimique de Coq6 de S. cerevisiae, impliquée dans l'hydroxylation en C-5

L'ubiquinone, ou coenzyme Q, est une molecule lipophile polyisoprenyle presente dans toutes les membranes biologiques chez les eucaryotes et composee d'un noyau aromatique actif de facon redox et d'une chaine grasse. Elle joue un role clef dans la chaine respiratoire et est un important antioxydant membranaire. Chez l'homme, des pathologies severes sont associees a des mutations de genes de la biosynthese de l'ubiquinone. Chez S. cerevisiae, la biosynthese de l'ubiquinone est realisee par un complexe multiproteique situe a la membrane interne mitochondriale. Certaines etapes de cette voie de biosynthese ne sont pas encore connues et tres peu ont ete caracterisees in vitro. L'etude presentee ici a permis d'ameliorer la comprehension de l'etape d'hydroxylation en C-5 a laquelle sont associes Coq6, monooxygenase a flavine, ainsi que Arh1 et Yah1, une adrenodoxine reductase et une adrenodoxine. Nous avons realise la premiere purification de Coq6 de S. cerevisiae avec son cofacteur flavinique et nous avons demontre in vitro l'existence d'une chaine de transfert d'electrons du NADPH au FAD de Coq6 via l'homologue humain de Arh1 et Yah1. Les etudes enzymatiques menees avec differents analogues de substrats synthetises n'ont pas permis de detecter d'activite enzymatique de Coq6 dans les conditions utilisees. Des etudes preliminaires de fluorescence nous ont neanmoins permis d'avancer une hypothese quant au substrat de Coq6, qui n'est pas connu avec certitude. Nous avons egalement realise une caracterisation cinetique de la reduction du FAD de l'homologue humain de Arh1 par le NADH et le NADPH, revelant ainsi son comportement particulier avec le NADPH, notamment en presence de Mg2+.