Procede d'identification de nucleotides a des positions determines dans des acides nucleiques cibles

La presente invention concerne un procede permettant de determiner l'identite d'un nucleotide d'interet dans une molecule d'acide nucleique cible par la combinaison de la cible avec deux amorces, ou la premiere amorce opere une hybridation a un emplacement 3' du nucleotide d'interet et s'etend a partir de celui-ci dans la cible, afin d'incorporer le complement du nucleotide d'interet dans un premier produit d'extension. La deuxieme amorce opere ensuite une hybridation a un emplacement 3' du complement du nucleotide d'interet et s'etend en fonction du premier produit d'extension, afin d'incorporer le nucleotide d'interet dans un deuxieme produit d'extension. Ensuite, la premiere amorce opere une hybridation a un emplacement 3' du nucleotide d'interet dans le deuxieme produit d'extension et s'etend a partir de celui-ci, afin de constituer, en combinaison avec le deuxieme produit d'extension, un fragment d'acide nucleique. Les premiere et deuxieme amorces sont destinees a incorporer une portion de la sequence de reconnaissance d'une endonuclease de restriction qui reconnait une sequence de base interrompu partiellement variable, c'est a dire, une sequence de formule A-B-C dans laquelle A et C sont un nombre et une sequence de bases essentielles a la reconnaissance RE, et B est un nombre de bases essentielles a la reconnaissance RE. La premiere amorce incorpore la sequence A, la deuxieme amorce incorpore la sequence C, et elles sont destinees, par rapport a la cible, de produire un fragment d'acide nucleique ou les sequences A et C sont separees par les bases B, ou le nucleotide d'interet se trouve au sein de la region B. L'action de la reconnaissance sur le fragment d'acide nucleique fournit un petit fragment d'acide nucleique qui peut faire l'objet d'une caracterisation, permettant ainsi de reveler l'identite du nucleotide d'interet.