烟草花叶病毒 P 54基因的原核表达与蛋白纯化

目的  烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）编码的与复制相关通读P183基因中，编码一个P54基因，其功能及其作用分子机制还鲜见报道。为获得P54蛋白纯化样品开展本研究，以期为P54蛋白的功能及其作用分子机制研究奠定基础。 方法  采用RT-PCR技术，从感染TMV的三生烟（Nicotiana tabacum var. Samsun NN）cDNA中扩增获得片段大小为1 425 bp的烟草花叶病毒P54基因，并克隆到原核表达载体pEASY-Blunt E1，转化E coli BL21（DE3）中进行诱导表达，包涵体透析复性后采用Ni-NTA柱层析纯化，Western-blotting进行鉴定。 结果  原核表达的TMV P54蛋白，主要以包涵体的形式存在；复性后经Ni-NTA柱层析纯化，SDS-PAGE表明纯化蛋白为一分子量约为60 kDa的单一条带。Western-blotting结果证实纯化蛋白为P54重组蛋白。 结论  本研究纯化得到了重组P54蛋白，为进一步深入研究P54蛋白的功能奠定基础。